生物饵料培养学试验课件.pptVIP

王珺 海南大学海洋学院 2010年6月 2．测定被测藻液的吸光度。 3．根据工作曲线求出藻液相应吸光度的藻细胞浓度（或由公式：被测藻液的藻细胞浓度=工作曲线中总的藻细胞浓度/工作曲线中总的吸光度×被测藻液的藻细胞吸光度）。 实验二 单细胞藻培养的容器、工具与用水的消毒 【实验目的】 学习并掌握培养单细胞藻的容器工具及用水的消毒方法，为今后成功培养单细胞藻打基础。 【实验原理和基础知识】 单细胞藻培养用的工具、容器及水都必须经过严格消毒，尽可能杀死一切生物，以免污染影响藻类生长和繁殖。 【实验用品】 一、实验器材 仪器设备： 恒温干燥箱、电炉、电子天平、充气泵。 工具容器： 250ml三角烧瓶（每人2只） 400ml烧杯30只 3000ml三角烧瓶10只 (6人/组) 搅拌棒 20根 移液管（5或10ml） 30支 塑料桶 4个 移液管（1ml） 30支 乳胶管 若干 容量瓶（100ml） 30只 量筒100ml 30只 二、药品 浓硫酸、重铬酸钾、漂白水或次氯酸钠溶液、硫代硫酸钠。 洗液的配制方法：称15g重铬酸钾至干燥的烧杯中，然后加入200ml粗硫酸，搅拌并加热至重铬酸钾溶解，即得洗液，冷却后将上清液倒入试剂瓶中备用。 三、实验材料 海水200L、淀粉碘化钾试纸2包、充气管、充气石10粒。 【实验操作步骤】 一、工具、容器消毒方法 1．洗液消毒法 所有待用三角瓶、烧杯、容量瓶等玻璃器皿均先用自来水（加去污粉）冲刷干净，然后倒入少许洗液，沿着内壁慢慢转动器皿，使其全部浸泡，放置10min后，将底部洗液回收（以备后用），然后用自来水冲净瓶子，把瓶口朝下晾干。移液管应用洗耳球吸取洗液，使其浸泡内壁，10min后，用自来水冲净内 2．烘箱干热消毒法 将洗净、凉干的玻璃器皿（移液管、金属工具等应用报纸或牛皮纸包扎好），扎瓶口用的纸，棉塞均放入烘箱。打开通气孔，接通电源，加热，待温度上升至120℃时关闭通气孔（在升温过程中，如果绿灯熄灭，红灯亮，表示箱内停止加热），恒温2h后，断电停止加热，然后待温度自然冷却至60℃以下，才能打开烘箱门取出容器、工具（实验室保种通常并用洗液消毒法和加热消毒法）。 3．煮沸消毒 小型的容器、工具可放入锅中，加水煮沸消毒15-30min，可杀死细菌的营养体，如果在水中加入2%Na2CO3可促使芽孢死亡。较大的三角烧瓶，可在瓶内加少量淡水，套上纸或放一只普通的玻璃漏斗，煮沸消毒15-30min，可使整个瓶壁消毒。然后倒出淡水，盖上消毒的牛皮纸。 、外壁。 二、培养用水的消毒方法 1.脱脂棉过滤法 取一桶海水置于高处，接好过滤装置、然后控制夹子，慢慢滴水过滤2L。 2．加热煮沸消毒法 将经脱脂棉过滤的海水，放至电炉烧开，冷却至室温（实验室保种通常并用脱脂棉过滤和加热煮沸法）。 3．漂白水消毒法 每人取2L过滤海水加入漂白水（含有效氯10﹪）0.5ml，搅拌均匀后盖上以防氯气逸出。静止放置16-24 h时消毒后再加入等量硫代硫酸钠中和，充气2 h，然后用淀粉碘化钾试纸测试是否有余氯（单胞藻二级培养、三级培养常用）。试纸无变蓝表明无余氯存在，即可使用。 【注意事项】 1.用加热法消毒培养用水时，三角瓶内的水量不能超过瓶子的2/3，瓶外面不能有水珠，瓶口用纸盖住，不要绑紧。 2.洗液在瓶子内转动时，注意瓶口不能对着自己，也不能对着他人。 3.干热灭菌过程中，实验者不能离开，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 4.烘箱内的温度需冷却至60℃以下，才能打开烘箱门取出工具、容器。 【作业与思考】 1. 培养单细胞藻的工具、容器的消毒有哪几种方法？ 2. 单细胞藻培养用水的消毒有哪几种方法？ 3. 单细胞藻藻种应如何保藏？ 实验三 单细胞藻培养液--母液的配制 【实验目的】 掌握培养液配制的原理、一般方法和步骤，为今后成功培养单细胞藻打基础。 【实验原理和基础知识】 单细胞藻大量生长繁殖，必须从环境中吸收各种营养元素，包括氮、磷、铁和微量元素等单细胞藻在不同配方的培养液中生长效果不同，因此要根据各种单细胞藻的生理需求选择合适的培养液。 把营养元素根据培养液配方进行高浓度配合（而且稀释液用蒸馏水或去离子水），一般浓缩10