【精选】实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法).ppt

一、实验目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。 二、实验原理 强酸可使糖类脱水成糖醛或羟甲基糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在630nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 　 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、实验器材 四 实验步骤 1、植物样品中可溶性糖的提取与测定 （1）可溶性糖提取：将干净植物叶片剪碎混匀，准确称取0.１0克-0.30g3份（三个平行），放入刻度试管中，管内加入5-10ml蒸馏水，盖上塞子，沸水中提取30min，提取液过滤至25ml容量瓶，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 （2）测定：吸取0.5ml提取液于大试管中，加入蒸馏水1.5ml,加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。 2、蔗糖标准曲线的制作 （1）取6支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的蔗糖溶液： （2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。以标准蔗糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。 3、结果计算　　　 植物样品含糖量（％）＝ C-糖含量（μg）； V-提取液体积（ml） a-吸取样品液体积（ml）；n-稀释倍数 W-样品重（g） 含糖总量一般为：2.1—20% 五、实验思考 P114： 2 下周实验：P167 植物组织中过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法） * * * * * * 实验9 可溶性总糖的测定(蒽酮法) １、仪器：分光光度计 ２、试剂 1%蔗糖标准液：P110 100ug/L蔗糖标准液：P110 浓硫酸； 蒽酮乙酸乙酯试剂：1g 蒽酮溶于50 mL 乙酸乙酯中，贮藏在棕色瓶中。 ３、材料：植物叶片 100 80 60 40 20 0 蔗糖含量（μg） 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2 水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 100ug/L蔗糖标准液（ml） 5 4 3 2 1 0 管号 (C×V×n) ×100 (a×W×106) *