流产布氏杆菌烯脂酰ACP还原酶的鉴定.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(5): 464~471 产布氏杆菌烯脂酰ACP 还原酶的鉴定* ** ** *** 雷鸣 马金成 王海洪 (华南农业大学生命科学学院，广州5 10642) 摘要 烯脂酰ACP 还原酶是细菌脂肪酸合成的关键酶之一 流产布氏杆菌基因组有2 个注释为烯脂酰ACP 还原酶基因f abI 的同源基因： 和 由这2 个 同源基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌FabI 有50%和51%的同源性，且都拥有与 f abI1 f abI2 f abI 大肠杆菌FabI 一样的催化中心Tyr-(Xaa) -Lys 序列 分别用携带这2 个同源基因的质粒载体转化大肠杆菌f abI 温度敏感突变 6 菌株JP1 111 转化子能在42 ℃生长，表明这2 个基因均能遗传互补大肠杆菌f abI 突变，并使此菌株恢复脂肪酸的合成 另 外，体外酶学分析显示，由这2 个同源基因编码的蛋白质都拥有烯脂酰ACP 还原酶活性，均能参与细菌脂肪酸合成 上述 结果证实，流产布氏杆菌同时拥有2 个同种类型的烯脂酰ACP 还原酶，是一种新的烯脂酰ACP 多样性的表现 关键词 流产布氏杆菌，细菌脂肪酸合成，烯脂酰ACP 还原酶 学科分类号 Q93 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 11.00463 布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的严重危害人类 在细菌脂肪酸合成代谢中的功能 [1-3] 健康和畜牧业发展的人兽共患的传染病 . 《中 1 材料与方法 [4] 人民共和国传染病防治法》将其归为乙类传染病 . 布氏杆菌病流行广泛，几乎遍布世界各地 近年 1 1 材料 来，随着养殖业和畜牧业的迅速发展，发病人数有 1.1 1 菌株、质粒和培养基 本研究 用的大肠 [1, 3] 杆菌菌株有 MG1655、DH5 、JP1111 ( (ts)) [8] 逐年增多的趋势 f abI 流产布氏杆菌(Brucella abortus) 是人患布氏病 和 BL2 1 (DE3)， 用的质粒载体有 pMD19-T、 的主要病原菌之一 随着分子生物学和细菌基因组 pBAD24M 和pET28(b) ，其他载体均为上述三质粒 学的发展，已经有多种布氏杆菌的基因组序列得到 的衍生质粒(具体构建见下文) LB 用作培养大肠 测定，其中包括流产布氏杆菌[5] 这为全面、深入 杆菌的丰富培养基，RB 作为检测脂肪酸合成突变 [9] 地研究布氏杆菌的发病机理，发展更为有效的防治 菌株的培养基 . 抗生素的 用浓度如下：100 mg/L 布氏杆菌病的技术手段提供了有力条件 氨苄青霉素、30 mg/L 卡那霉素、0.02%