南蛇藤总萜诱导自噬抑制结直肠癌细胞增殖的试验研究-江苏中医药.PDFVIP

实 验 研 究 南蛇藤总萜诱导 自噬抑制结直肠癌细胞增殖的 实 验 研 究 ， ， 杨 林 1 2 王 梅 1 3 钱 亚云 1 金 凤 1 王海波 1 史有 阳 1 郭试瑜 4 久光正 4 刘延庆 1 （1.扬 州大学 医药研 究所 ，江 苏扬 州 225009 ； 2.扬 州大学 医学院 ，江 苏扬 州 225009 ； 3.扬 州市第一人 民 医院 ，江 苏扬 州 22500 1 ； 4.昭和 大学 医学院 ， 日本 东京 142 ） 摘 要 目的 ：探 讨 南蛇藤 总 萜 （COE ）是 否通过诱 导 自噬 来抑 制 结 直肠 癌 细胞 增 殖 。 方 法 ：用不 同浓度 的 COE 处理 体 外培 养 的 大肠 癌 HT-29 细胞 ，噻 唑 蓝 （MTT ）法检 查 细胞 存 活 率 ，透射 电镜 （TEM ）观 察 细胞 形 态 ，免 疫 印迹 法 （Western blot ）检 测 COE 对 细胞 自噬相 关蛋 白表 达 的影 响 ，并采 用 自噬抑 制 剂 3- 甲基腺 嘌呤 （3-MA ）联 合 COE 干预 HT-29 细胞 ， 用吖啶橙 染 色细胞 、 法检 测 对 抑 制 细胞 增 殖 的影 响 。 结果 ： 抑 制 细胞 的增 殖 ，作 用 MTT 3-MA COE HT-29 COE HT-29 的 为 ； 随着 浓度 的升 高 ， 示 细胞 中 自噬体 明显 增 多 ， 和 治疗组 比较 ， 联 合 24h IC50 156μg/mL COE TEM COE COE 3-MA 组 的 细胞 生存 率升 高 ，而 自噬 泡 （ ）的数 量显著 下 降 ，微 管相 关蛋 白 （ ）表 达也 降低 。 结论 ： 可 能通过 上 AVO - Ⅱ LC3- Ⅱ COE 调 同源结构域蛋 白抗体 （ ）和 的表 达 来增加 细胞 的 自噬 活性 ，从 而抑 制 细胞 的增 Bcl-2 -1 Beclin-1 LC3- Ⅱ HT-29 HT-29 殖作 用 。 关键 词 南蛇藤提 取 物 （COE ） 细胞 自噬 人 结 直肠 癌 细胞 细胞存 活率 病 理 学 体 外 实验 中图分 类号 R282.7 10.5 文献标 志码 A 文章编 号 1672-397X （20 17 ）02-0075-04 南 蛇 藤 （Celastrus orbiculatus Thunb.），又 名 过 购 于 Hyclone 公 司 ； 四 甲基偶 氮 唑盐 （MTT ， 批 号 山风 、降龙草 、黄藤等 ，为卫矛科南蛇藤属植 物 ，始 载 298-93-1）、3- 甲基 腺 嘌 呤 （3-MA ） 购 于 Sigma 公 于清代 《植物名实 图考》 。 现代药物化学研究证 实 ，南 司 ；吖 啶橙 （上 海 生 工 生 物 工 程 有 限公 司 ）；Beclin- 蛇藤植物体 的萜类 、黄酮类 、生物碱等含量较高 。 本 、 抗体购于