超声微泡联合双自杀基因慢病毒载体pLenti6―EGFP―KDRP―CD-TK构建和鉴定.docVIP

超声微泡联合双自杀基因慢病毒载体pLenti6―EGFP―KDRP―CD/TK构建和鉴定 　　【摘 要】目的：构建较稳定的超声微泡包裹的双自杀基因慢病毒载体，为恶性肿瘤靶向基因治疗的实验研究奠定基础。方法：提取正常人外周血gDNA扩增出KDRP、CD、TK基因，链接到pMD18-T载体上，经酶切后连接到相应的pLenti6-EGFP载体上，转染至293T细胞，荧光显微镜下观察GFP的表达情况，并计算病毒滴度；取声诺维微泡混悬液，滴加入病毒载量的病毒上清液孵育，测定其外观、包封率、载药量、粒径大小以及稳定度等。结果：得到高滴度（3.5×1012pfu/L）的双自杀基因慢病毒载体pLenti6-EGFP-KDRP-CD/TK；成功获得较稳定的载药微泡，粒径范围92%以上为2～5μm，平均粒径约2.90μm；其包封率为90.6±3.1%，载药量为29.2±0.9%。结论：成功制备质量较好超声微泡包裹的pLenti6-EGFP-KDRP-CD/TK，为临床实时可视状态进行超声定位控释和载质粒微泡基因治疗肿瘤奠定了基础。 【关键词】超声微泡；双自杀基因慢病毒载体；基因治疗 【中图分类号】R341 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0013-02 目前，基因治疗已成为一种全新的肿瘤治疗模式，其中自杀基因治疗是一种颇具临床应用潜力的治疗策略， 但是由于