动物传染病学（彭大新）实验一 鸡白痢的检疫.docVIP

实验一 鸡白痢的检疫 　　 （一）实验目的　　　 熟悉和掌握鸡白痢的血清学检疫方法。　　 （二）实验原理　　　 快速全血平板凝集反应　　 （三）实验准备　　　 1.抗原： 鸡白痢全血凝集反应抗原，由农业部中国兽药监察所购得，或其他来源的合格产品。抗原为福尔马林灭活的细菌悬液，每毫升含菌100亿。　　　 2.用具：洁净玻璃板、干净纱布、7#或9#注射针头、75%酒精棉球、酒精灯、移液器、手电筒。　　 （四）实验步骤?　　　 1.先将抗原瓶充分摇匀，用移液器吸取抗原20 μL，垂直滴于玻片上；　　　 2.用注射针头刺破鸡的翅静脉或冠尖，以移液器吸取血液一满环(约0．02m1)混入抗原内；　　　 3.随即搅拌均匀，并使散开至直径约2cm为度；　　　 4.用手电筒反照玻璃板，仔细观察并判定。　　 （五）结果分析　　　 1.抗原与血清混合后在2min内发生明显颗粒状或块状凝集者为阳性。　　　 2.2分钟以内不出现凝集，或出现均匀一致的极微小颗粒，或在边缘处由于临干前出现絮状者判为阴性反应。　　　 3.在上述情况之外而不易判断为阳性或阴性者，判为可疑反应。　　 （六）注意事项　　　 1.抗原应在2～15℃冷暗处保存，从杀菌之日算起有效期6个月。　　　 2.本抗原适用于产卵母鸡及1年以上公鸡，幼龄鸡敏感度较差。　　　 3.本试验应在20℃以上室温中进行。　　　 4.手电筒反照可以不分阴晴天或白昼。　　　 5.每次使用金属管可以用酒精棉球擦干、消毒。　　　 6.使用酒精灯要特别注意安全：防鸡翅掀翻酒精灯或防工作服碰到火焰。　　 （七）思考题　　　 1.试比较鸡白痢检疫的全血平板凝集反应与血清平板凝集反应的异同点。　　　 2.我国绝大多数鸡群鸡白痢的阳性率比较高，试分析其原因和拟定防制对策。 实验二 巴氏杆菌病的实验室诊断 　　 （一）实验目的　　　 初步掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断步骤和方法。　　　 了解巴氏杆菌病的病理变化。?　　 （二）实验准备　　　 染色液：美兰染色液、瑞氏染色液、革兰氏染色液（草酸铵结晶紫、革兰氏碘液、95%酒精、沙黄水溶液）、　　　 用具：搪瓷盘、碘酊棉、75%酒精棉、组织镊、手术刀（带柄）、普通剪刀、塑料洗瓶、纱布、酒精灯、载玻片、吸水纸（载玻片大小）、铂耳、显微镜、擦镜纸、染色废液缸、甲苯、镜油、血培养基平板、巴氏杆菌病死鸡?　　 （三）实验步骤　　　 1、分离培养（划线培养）　　　　 ① 无菌解剖病死鸡暴露胸腹腔，露出其心、肝、肺等。　　　　 ② 用火焰灼烧手术刀片，烫肝脏表面，并迅速划小口。　　　③ 用无菌铂耳钩取肝组织，划线分离于血琼脂平板上，37℃/24hr培养后，观察菌落形态。　　　 2、触片制作　　　　 ① 肝组织触片（美兰染色）　　　　 取一小块肝组织，并用吸水纸吸一下，在洁净的载玻片上轻轻地作2～3个压迹制成肝触———→固定后，滴加适量美兰染色 液———→水洗——→吸干或自然干燥。　　　　 ② 心血涂片（瑞氏染色）　　　　 用无菌铂耳钩取2－3铂耳心血于洁净载玻片上，均匀涂成直径　　　　 约1cm2的涂面，制成心血涂片后———→盖上一块玻片大小清洁滤纸片 在其上轻轻滴加瑞氏染色液，至略浸过滤纸并保持湿润?　　　　 加等量蒸馏水 掀去滤纸片 直接用自来水冲洗 吸干或自然干燥。　　　　 ③ 革兰氏染色（纯培养）　　　　 在洁净载玻片上醮取三铂耳生理盐水，用灭菌铂耳勾取少许细菌，并在生理盐水上涂成1cm2涂面 在干燥固定好的涂片上?　　　　 水洗 水洗 水洗?　　　　 水洗 吸干或自然干燥。　　　 3、仔细观察病死鸡的病理变化（心、肝、肺等），并将台面收拾干净后，取出显微镜。　　　 4、观察细菌形态　　　　 镜检; 打开光圈 黄圈10×调视野 玻片涂（触）面滴加镜油; 白圈100×直接观察　　 （四）结果分析　　　 * 在油镜下观察：鸡巴氏杆菌（多杀性巴氏杆菌）呈卵圆形，两极浓染，为革兰氏阴性（纯培养为红色）。　　　 * 在鲜血琼脂上，鸡巴氏杆菌菌落呈浅灰色半透明的露珠状，较平坦，不溶血。　　 （五）注意事项　　　 （1）血培养基制备式所采鸡血必须无菌，否则以产生杂菌　　　 （2）在心血涂片进行瑞氏染色时,要盖上一块玻片大小清洁滤纸片,以防染液中的杂质进入涂片上,影响镜检效果。　　 （六）思考题　　　 试述鸡巴氏杆菌病的微生物学检查程序。 实验三 结核病检疫 　　 （一）实验目的　　　 掌握牛提纯结核菌素(PPI))变态反应的诊断方法　　 （二）实验原理　　　 传染性变态反应　　 （三）实验准备　　　 牛型提纯结核菌素：中牧股份成都药械厂提供，2~8℃保存，有效期1