兽医临床诊断学（卞建春）实验8 血液常规检验（二）.docVIP

实验八 血液常规检验（二） 白细胞分类计数（differential count of white blood cell ，DC）是指利用染色的血液涂片计算血液中各类白细胞的百分率。外周血液中的白细胞主要有5中，即嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞、淋巴细胞、单核细胞，它们各有其特定的生理机能，在正常时这5种白细胞之间有一定的比例。但在病理情况下，白细胞总数的变化反映机体防御机能的一般状态，各种白细胞之间百分比的变化，则反映机体防御机能的特殊状态。由于白细胞总数的增减并不一定表示各类白细胞平均增多或减少，常常仅限于某一种或两种白细胞数的变化，从而引起白细胞之间百分比的相对改变。因此，白细胞计数对疾病的诊断具有一般意义，而白细胞分类计数则具有具体意义，在分析临床意义时，必须把二者结合起来。 一、目的要求 掌握血涂片的制作方法、染色技术、白细胞分类计数法。要求能制出合格的血涂片并能够认识各类白细胞。 二、实验内容 1．器材载玻片、染色盆及支架、染色缸、洗瓶、显微镜、油镜、白细胞分类计数器、吸水纸等。 2．试剂瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。将染色粉置于研钵中，加少量甲醇研磨，使其溶解，将已溶解的染液倒入洁净的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室温中保存7日后即可应用。新配的染液偏碱性，放置后可呈酸性。保存时间愈久，染色能力愈佳。 3。涂片方法取无油脂的洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（推片一端的两角应磨去，也可用血细胞计数板的盖片做为推片），用左手的拇指及中指夹持载玻片，右手持推片；先取检血一小滴，放于载玻片的右端，将推片倾斜30°～40°角，使其一端与载玻片接触并放于血滴之前，向后拉动推片，使与血滴接触，待血液扩散形成一条线之后，以均等的速度轻轻向前推动推片，则血液均匀地被涂于载玻片上而形成一薄膜（图8-1）。 良好的血片，血液应分布均匀，厚度适当。对光观察时呈霓红色，血膜应位于玻片的中央，两端留有空隙，以便注明畜别，编号及日期。 4．染色方法 瑞氏染色法：是最常用的染色法之一。将自然干燥的血片用蜡笔于血膜两端各划一道横线，以防染液外溢。置血片于水平支架上，滴瑞氏染液于血片上，并计其滴数，直至将血膜浸盖为止，待染1～2min后，滴加等量缓冲液或蒸馏水，轻轻吹动，使之混匀，再染4～10min，用蒸馏水冲洗、吸干、油镜观察。 5．分类计数先用低倍镜检视血片上白细胞的分布情况，一般是粒细胞、单核细胞及体积较大的细胞分布于血片的上、下缘及尾端，淋巴细胞多在血片的起始端。滴加显微镜油，转过油镜头进行分类计数。 计数时，为避免重复和遗漏，可用四区、三区或中央曲折计数法推移血片，记录每一区的各种白细胞数。每张血片最少计数100个细胞，连续观察2～3张血片，求出各种白细胞的百分比（图8-2）。 记录时，可用白细胞分类计数器，也可事先设计一表格，用画“正”字的方法记录，以便于统计百分数。 6．各种白细胞的形态特征各种白细胞的形态特征主要表现在细胞核及细胞浆的特有性状上，并注意细胞的大小。 （1）嗜中性粒细胞白细胞中数量最多的一种。细胞呈园球形，比红细胞大。胞质中有特殊的细微颗粒，被染成极淡的紫红色，镜下不明显。核紫色，一般呈分叶状（2～3叶），细胞愈老，分叶愈多。 （2）嗜酸性粒细胞 数量较少。较嗜中性粒细胞大。胞质中有被酸性染料染成深红色的粗大颗粒，颗粒分布及大小均匀。核兰紫色，一般分为两叶或呈肾形。 （3）嗜碱性粒细胞 数量极少，不易找到，可观察示范片。此细胞大小与嗜酸性细胞类似。胞质中有大小不等，分布不均的颗粒，被碱性染料染成深兰色。 （4）淋巴细胞 数量多，有大、中、小之分，以小淋巴细胞数量最多。小淋巴细胞：稍大于红细胞。核大，常呈球形，染成兰紫色。胞质少，染成天兰色，核与胞质间常有一白色亮圈。中淋巴细胞：约两倍于红细胞。胞质较多。大淋巴细胞：正常血液中少见。与单核细胞有些相似。 （5）单核细胞 数量很少。是最大的血细胞，胞质较多，染成兰灰色，有的细胞质中可见嗜天青颗粒。核呈马蹄形和不规则形，常位于细胞一侧，染色较淋巴细胞核浅，通常呈网状，有的可见核仁。 （6）血小板 为形态不规则，染成淡兰色的小体。常聚集成群。无核。中央有嗜碱性颗粒。 7．正常值见表8-1 表8-1各种动物白细胞分类正常平均值（％） 动物种类 嗜碱性 白细胞 嗜酸性 白细胞 嗜中性白细胞 淋巴 细胞 单核 细胞 晚幼细胞 杆型核 分叶核 马 牛 羊 猪 骆驼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4.5 4.0 0.5 2.5 8.0 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 4.0 3.0 5.5 5.5 6.5