349例乳腺癌HER―2基因扩增和蛋白表达相关性探究.doc

349例乳腺癌HER―2基因扩增和蛋白表达相关性探究 　　[摘要] 目的 了解乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2（HER-2）基因扩增与Her-2/neu蛋白表达的一致性与相关性。方法 采用荧光原位杂交（FISH）法及免疫组化（IHC）法分别检测349例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因扩增与蛋白表达情况，分析二者检测结果的一致性与相关性。 结果FISH与IHC符合率为55.3 %，结果存在一致性（Kappa=0.189，P=0.000），呈正相关（r=0.434，P=0.000）。 结论 FISH与IHC两种检测结果存在一致性，但IHC（+～+++）患者均应以FISH检测作为评价HER-2基因是否扩增的标准方法。 [关键词] 乳腺癌；人表皮生长因子受体-2；荧光原位杂交；免疫组织化学 [中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）20-16-03 人表皮生长因子受体-2（HER-2）基因扩增与蛋白的过度表达提示该患者的内分泌治疗效果差，而应用曲妥珠单抗敏感性好[1-2]。目前指导临床治疗的常规检测方法为免疫组织化学（IHC）法和荧光原位杂交（FISH）法。本资料主要探讨IHC法HER-2蛋白表达与FISH法HER-2基因扩增的一致性与相关性，为临床应用曲妥珠单抗等药物提供参考。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2010年11月～2013年3月在泸州医学院附属医院病理科及2010年10月～2012年11月在四川省德阳市人民医院病理科进行IHC与FISH检测的349例患者，石蜡切片分别用于IHC与FISH检测。 1.2 试剂与探针 IHC检测使用基因科技（上海）有限公司抗体，ER克隆号：SP1；PR克隆号：SP2：erbB-2多克隆抗体；Ki-67克隆号：MIB-I.FISH，检测使用北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒。 1.3 方法 1.3.1 IHC技术 采用免疫组化envision法进行检测，Her-2蛋白棕色阳性定位于细胞膜。 1.3.2 FISH技术 按北京金普嘉公司Her-2基因扩增试剂盒说明书操作：（1）标本要求：2年以内的浸润性乳腺癌患者的石蜡包埋组织切片。新鲜标本取下后1h内放入10%中性福尔马林固定，用量为组织块的10倍以上，固定时间为6～48h；（2）老化玻片：切片厚3?m，置于干净的涂胶玻片，65℃烘烤过夜。（3）切片处理：常规脱蜡复水；高压锅抗原修复3min，冷却4min；37℃ 2×SSC液5min漂洗两次；37℃胃蛋白酶溶液（5?g/mL）+0.01mol/L HCL消化10～18min；37℃ 2×SSC液漂洗5min两次；乙醇梯度脱水后自然干燥玻片。（4）变性杂交：滴加10?L探针混合液覆盖组织，封片胶封闭盖玻片，于杂交仪中83℃变性8min，42℃杂交16h。（5）洗涤、判读：取出切片后去除封片胶，室温下于2×SSC液中浸泡使盖玻片自然脱落；46℃ 2×SSC漂洗10min；46℃ 0.1% NP40漂洗5min；室温70%乙醇浸泡4min；暗处自然干燥玻片后加10?L DAPI覆盖杂交区域并盖上盖玻片，暗处放置10～20min后荧光显微镜下观察。 1.4 结果判定标准 1.4.1 IHC结果判定 无着色者为（?）；任何比例的浸润癌细胞呈微弱、不完整的细胞膜着色者为（+）；10%的浸润癌细胞呈微弱至中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄着色者，或30%的浸润癌细胞呈现强的、完整的细胞膜棕褐着色者为（+++）[3]。 1.4.2 FISH结果判定 （1）浸润癌区肿瘤细胞Her-2红信号明显成簇成团，判定为簇状扩增；（2）若不同于（1）的情况，计数30个细胞并计算Her-2红信号与着丝粒绿信号之比值，Ratio2.2为阳性；Ratio介于1.8～2.2之间时，增加计数细胞至100，若比值仍不变则判断为不确定[4]。 1.5 统计学方法 用SPSS11.5统计学分析软件分析，两种方法检测结果的一致性采用Kappa检验，P 　　本研究中，349例浸润性乳腺癌标本的FISH检测结果显示HER-2基因扩增率为28.08%（98/349），与某些国外报道基本一致[9-10]。IHC检测HER-2蛋白状态为（-/+）时，FISH检测HER-2基因扩增率为4.76%（5/105），两者符合性较好，与大多数文献报道一致[4，11]，提示IHC（-/+）时也应进一步行FISH检测进行筛查，避免遗漏部分HER-2蛋白状态为（-/+）但其HER-2基因扩增者的治疗；IHC（++）时的FISH检测HER-2基因扩增率为29.59%（50/169），与Heba AL-Khatta