国家标准-》微生物肥料菌种鉴定技术规范.doc

ICS 65．080 B 10 N Y 中华人民共和国农业行业标准 NY／T 1 736—2009 微生物肥料菌种鉴定技术规范 Technical specification of strain identification for microbial fertilizers 2009—04—23发布 2009—05—20实施 中华人民共和国农业部发布  NY／T 1736 2009 刖 瞢 本标准的附录A为规范性附录，附录B、附录C和附录D为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归1：3。 本标准起草单位：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心、中国农业科学院农业资 源与农业区划研究所。 本标准主要起草人：冯瑞华、李俊、沈德龙、姜听、李力、杨小红、曹风明、关大伟、陈慧君。  NY／T 1736 2009 微生物肥料菌种鉴定技术规范 1范围 本标准规定了微生物肥料使用菌种鉴定程序与方法的选用原则。 本标准适用于微生物肥料科研、教学、质检和生产等领域中的菌种鉴定。 2觏范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 NY／T 11 13—2006微生物肥料术语 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 1 细菌bacterium 形体微小，结构简单，通常以二分裂方式进行繁殖的单细胞原核生物，基本形态有球状、杆状、弧状 和螺旋状。 3．2 放线菌actinomycete 细胞呈丝状、孢子方式繁殖和高(G+C)mol％的革兰氏阳性细菌。 3．3 酵母菌yeast 单核的单细胞真菌，以芽殖或裂殖方式行无性生殖，或形成孢子行有性生殖。 3 4 丝状真菌filamentous fungus 菌丝体发达，不产生肉眼可见子实体的真菌。 3．5 种species 由表型特征相似、遗传性状相近的菌株组成，并与其他类群的菌株存在明显差异。 3．6 菌株strain 属于同一个种，但来源不同的单细胞或纯培养的后代。 3．7 纯培养物pure culture 由单个细胞繁殖而来的培养物。 3．8 纯度检测purity examination 检测菌种是否为纯培养物的过程。 1  NY／T 1736--2009 3．9 鉴定identification 根据通用的检索系统，对未知微生物菌株进行性状观察和测定，确定该微生物分类地位的过程。 4鉴定原则 4．1用于鉴定的菌株应为纯培养物。 4．2依据所鉴定菌株的类群和特性，选择相应的鉴定检索系统和鉴定方法。 4 3鉴定结果应与对应的鉴定检索系统或模式菌株性状进行对比，确定菌株的分类地位。 5菌种鉴定常规流程图 6鉴定方法 6 1纯度检测 6 1 1菌落形态观察 在适宜培养基平板上，将待鉴定培养物划线或稀释涂布，经适宜条件下培养后，选取划线或稀释涂 布分离得到的单菌落，观察其在同一平板上的大小、形状、颜色、质地、光泽等。 6．1．2菌体形态观察 挑取待鉴定细菌培养物，涂布于载玻片上无菌水滴中，进行简单染色或革兰氏染色；酵母菌和丝状 真菌制成水浸片。冠微镜下观察菌体形态。 6．1．3纯度确定 菌落和菌体形态一致者，确定培养物符合要求。 6．2培养特征观察 6．2．1细菌菌落特征 将待鉴定培养物划线或稀释涂布于营养肉汤培养基(附录A．1)或其他适宜的细菌培养基平板上， 适宜条件下培养2 d～5 d后，观察和记录幼龄和老龄菌落的大小、形状、质地、边缘、隆起、颜色、光泽、透 明度等性状。 6．2．2放线菌培养特征 将待鉴定培养物点植、划线或稀释涂布于适宜的培养基(附录A．3～A．7)平板上，28℃培养5 d～ 15 d，观察菌落的大小、形状、表面状况、气生菌丝、基内菌丝的颜色及可溶性色素。 6．2．3酵母菌培养特征 2  NY／T 1736--2009 将待鉴定培养物划线或稀释涂布于麦芽汁琼脂(附录A．9)平板上，25C～28℃培养3 d～7 d，观察 菌落的大小、形状、质地、隆起、边缘、颜色、光泽等性状。 将待鉴定培养物接种于麦芽汁液体培养基中，25 9C～28C培养3 d，观察是否形成醭膜、菌环或岛及 沉淀。 6．2．4丝状真菌培养特征 将待鉴定培养物点植或稀释涂布于PDA培养基(附录A11)或察氏培养基(附录A 8)平板上，25C～ 28*(2培养2 d～14 d，观察菌落质地、颜色、生长速度、色素的产生情况、渗出液、菌落背面的颜色等。 6．3菌体形态特征观察 6．3．1细菌形态特征 挑取在适宜培养基上生长的幼龄培养物，涂片、革兰氏染