糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)使用说明.pdfVIP

糖原D-PAS染色液 （淀粉酶消化法）使用说明 货号：G1282 有效期：6个月有效。 产品内容： 编号 名称 5×50ml 5×100ml Storage 试剂 （A）淀粉酶溶液 50ml 100ml 4℃ 试剂 （B）过碘酸溶液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂 （C）Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂 （D）Mayer 苏木素染色液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂 （E）酸性乙醇分化液 50ml 100ml RT 产品说明： 糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显 示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏 液性物质和某些酸性物质，以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。 过碘酸 （又称高碘酸）是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使 之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于高碘酸还可氧 化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在即能把乙二 醇基氧化成醛基，又不至于过氧化，这是很关键的步骤。 PAS技术是唯一可检测不同种类的黏液物质 （如糖原、黏蛋白和糖蛋白）的方法，但PAS技 术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质 （如黏蛋白和糖原），需加入糖原消化 步骤。大多数情况下可用α-淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解。形成水溶性的 双糖-麦芽糖，在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖 原的一种有效手段，但是出于安全以及缺乏标准唾液的考虑，不主张应用唾液。 糖原D-PAS染色液的特点在于糖原PAS染色之前经淀粉酶处理，糖原消化时需要两张相同的 切片，脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理，另一张仅用缓冲液处理。然后两张 切片均用PAS法染色，消化后染色消失表明存在糖原。 操作步骤 （仅供参考）： 1、两张相同切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇入水。 2、一张切片入淀粉酶溶液处理20min。另一张不用淀粉酶溶液处理，入水1h作为对照。 3、流水冲洗两张切片各5～10min。 4、入过碘酸溶液中，室温放置5～8min，一般不宜超过 10min。 5、自来水冲洗1次，再用蒸馏水浸洗2次。 6、入 Schiff Reagent，置于室温阴暗处，浸染10～20min。 7、自来水冲洗10min。 8、入Mayer苏木素染色液中，染细胞核1～2min。 9、(可选)酸性乙醇分化液分化2～5s。 10、自来水冲洗 10～15min后，更换双蒸水清洗，使其返蓝。 11、 二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 糖原、中性、唾液黏蛋白 红紫色 各种糖蛋白 红紫色 细胞核 蓝色 未处理的切片，糖原呈亮红色或红紫色；淀粉酶处理的切片，糖原阴性。 注意事项： 1、 切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。 2、 需使用一张阳性对照片验证酶的活性。 3、 过碘酸氧化时间不宜过久，氧化时的温度以18～22℃最佳。 4、 试剂A、试剂B、试剂C应置于4℃密闭保存，使用时避免接触过多的阳光和空气。 使用前，最好提前取出恢复到室温，避光暗处使用。 5、 酸性乙醇分化液应经