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细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)操作步骤及注意事项 货号：G0170 规格：100T 有效期： 12个月有效。 产品内容： 产品名称 规格 Storage 试剂(A):MDC Stain 1ml -20℃ 避光 试剂(B): 10×Wash buffer 20ml 4℃ 试剂(C): Collection buffer 10ml 4℃ 产品说明： 自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内 降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长 寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌 等。 单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检 测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。 细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与 EB合用双染。 自备材料： 荧光显微镜、低速离心机、EB 、载玻片、盖玻片 操作步骤(仅供参考)： (一)、MDC单独染色： 1、用去离子水稀释10×Wash buffer至1×。 2、800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Washbuffer清洗细胞1次，弃上清。 3、加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10/ml。6 4、取适量90μl的细胞悬液至新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，轻轻混匀。 5、室温避光染色15～45min。 6、800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Washbuffer清洗细胞2次，弃上清。 7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。 8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。 (二)、与EB双染色： 1、用去离子水稀释10×Wash buffer至1×。 2、800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Washbuffer清洗细胞1次，弃上清。 3、加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10/ml。6 4、取适量90μl的细胞悬液至新的EP管中，分别加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB 染色液，轻轻混匀。 5、滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。 6、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。 染色结果： 正常细胞 细胞被均匀染成黄绿色荧光 凋亡细胞 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大 小不一、致密浓染的绿色颗粒 注意事项： 1、MDC Stain和EB试剂有一定毒性，请小心操作。 2、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。