蛋白质结构与功能-3(临床3班).pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 132℃高压消毒5h，lmol/L NaOH浸泡污染物1h和次氯酸钠处理2h等,彻底销毁含致病因子的动物尸体、组织块或注射器。免疫组化技术、蛋白印迹(Western blotting)检测 * * * * * 土壤溶于水的例子，外科补液的例子 * * * · * * * * * * * * * 造成变性的因素 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 变性的本质 —— 破坏非共价键，不改变多肽链的氨基酸序列。 （三）蛋白质空间结构破坏而引起变性 * 应用举例 临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。 此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 （三）蛋白质空间结构破坏而引起变性 * 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 （三）蛋白质空间结构破坏而引起变性 可逆变性 * * 蛋白质沉淀 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 三、蛋白质空间结构破坏而引起变性 * 蛋白质的凝固作用 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 * 变性、沉淀和凝固的关系 变性蛋白质不一定沉淀 沉淀蛋白质不一定变性 沉淀蛋白质也不一定凝固 但凝固的蛋白质一定已变性，且为不可逆变性 （三）蛋白质空间结构破坏而引起变性 * （四）蛋白质有紫外吸收的特性 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 * （五）蛋白质的呈色反应 ⒈茚三酮反应(ninhydrin reaction) 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 ⒉双缩脲反应(biuret reaction) 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 * Summary: 蛋白质的重要理化性质： 两性电离——名词：蛋白质等电点 胶体性质——稳定蛋白质溶液的因素 空间结构破坏会导致变性——名词：蛋白质的变性 紫外吸收——蛋白质的定量测定 呈色反应——蛋白质的定性定量测定 * 蛋白质的分离、纯化与结构分析 Seperation, purification and structure analysis of proteins 第 五 节 * 一、透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的小分子化合物 * 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 * 超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。 * 二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法 *使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 *盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 * * 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法 * 三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(electrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 SDS* 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳（二维电泳）是蛋白质组学研究的重要技术。 2D-电泳 三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离 * 四、应用相分配或亲和原理可将蛋白质进行层析分离 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）