【精选】细胞生物学植物组织培养实验方案.docVIP

细胞学实验之植物组织培养 参考参考 实验目的： 1.学习和配制植物组织MS固体培养基； 2.学习和使用高压蒸汽灭菌锅灭菌； 3.了解和掌握无菌操作； 4.将胡萝卜贮藏组织培养成胡萝卜幼苗。 二、实验原理： 细胞全能性(cell totipotency)：植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。 植物的任何细胞、组织和器官，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和生长调节剂等组成的培养基中，使其生长、分化、形成完整植株的过程，称为植物组织培养。 三、实验器材： 1、实验材料?：新鲜的质量良好胡萝卜肉质根。 2、实验设备? （1）仪器设备：? 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、电磁炉，三角瓶、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、封口膜、牛皮纸、橡皮筋、棉线、电炉、高压蒸汽灭菌锅、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、酒精棉球、小块纱布、灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、摇床（震荡培养箱）等。? ?其中主要仪器设备为灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱等。? （2）药品? 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、?6-BA?（?6-苄基腺嘌呤）、?KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水、MS培养基母液化学组分、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2。MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、愈伤组织继代培养基、75％酒精。 四、实验步骤： 实验总体流程：?? 1.MS培养基母液的配制与保存 母液的配制： 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。 1、MS大量元素母液（10×） 称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。 化学药品 1升量 10升量（10×） 50升量（50×） ① NH4NO3 1650 mg 16.5g ② KNO3 1900 mg 19.0g ③ CaCl2·2H2O （CaCl2） 440 mg （ ） 4.4g ④ MgSO4·7H2O（MgSO4） 370 mg （ ） 3.7g ⑤ KH2PO4 170 mg 1.7g 2、MS微量元素母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） ① MnSO4·4H2O （ MnSO4·H2O） 22.3mg （21.4 mg） 223mg （214 mg） ② ZnSO4·7H2O 8.6 mg 86mg ③ H3BO3 6.2 mg 62 mg ④ KI 0.83 mg 8.3 mg ⑤ Na2MoO4·2H2O 0.25 mg 2.5mg ⑥ CuSO4·5H2O 0.025 mg 0.25mg ⑦ CoCl2·6H2O 0.025mg 0.25mg 注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。 3、MS铁盐母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） Na2·EDTA 37.3 mg 373 mg FeSO4·7H2O 27.8 mg 278 mg 注意配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。 4、MS有机物母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品 1升量 10升量 100升量（100×） ① 烟酸 0.5 mg 5mg ② 盐酸吡哆素（VB6） 0.5 mg 5mg ③ 盐酸硫胺素（VB1） 0.4 mg 4 mg ④ 肌醇 100 mg 1 g ⑤ 甘氨酸 2 .0mg 20m