pPIC9K序列.docx

载体基本信息出品公司:Invitrogen载体名称:pPIC9K, pPIC 9K质粒类型:毕赤酵母蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:AOX1克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:9276 bp5 测序引物及序列:5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′； alpha-Factor-F: 5′-TACTATTGCCAGCATTGCTGC-3′3 测序引物及序列:3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′载体标签:N-alpha factor载体抗性:氨苄和卡那筛选标记:HIS4备注:利用alpha分泌因子，分泌表达蛋白。产品目录号:V175-20稳定性:稳定 Stable组成型:组成型 Constitutive病毒/非病毒:非病毒载体质粒图谱和多克隆位点信息载体简介pPIC9K载体中存在卡那抗性基因，允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝，载体其余部分与pPIC9载体完全一样。pPIC9K载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。pPIC9K载体详细信息如下：? pPIC9载体大小9276 bp，是融合表达载体。? 载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.? 利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。? 在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。? 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。? 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)?为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)?将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。载体序列LOCUS pPIC9K9276 bp DNA circularSYNDEFINITION pPIC9KACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.COMMENT This file is created by Vector NTI /COMMENT VNTAUTHORNAME||FEATURES Location/Qualifiers source 1..9276 /organism=pPIC9K /mol_type=other DNA misc_feature 1152..1172 /label=alpha_factor_primer misc_feature complement(1327..1347) /label=3_AOX1_primer CDS complement(1980..4514) /label=ORF frame 2 gene complement(4928..5743) /label=KanR2 /gene=KanR2 CDS complement(4928..5743) /label=ORF frame 3 misc_feature complement(5908..5927) /label=pBRrevBam_primer CDS complement(5909..6631) /label=ORF frame 3 misc_feature complement(6913..6935) /label=pGEX_3_primer rep_origin complement(7332..7951)