RGQ操作说明.docVIP

RotorGene Q荧光定量PCR操作简要规程 程序启动：双击桌面“Rotor-Gene Q Series Software”图标，进入程序界面 新建反应条件及保存实验模板 选择对话框中的“Empty Run”，点击“New”按钮； 选择本次实验所使用的转子，在“Locking Ring Attached”前打“√”确认，点击“Next”按钮； 根据要求输入本次实验的操作人员“Operator”，实验中发生的异常情况如样本溶血等记入到“Note”中，在“Reaction Volume”中输入反应体积（注：careHBV v2及careHCV v2均为50ul）。点击“Next”进入下一步骤； 点击“Edit Profile…”进入PCR反应条件建立； 根据说明书要求输入反应条件。点击“Insert After…”在跳出框中选择对点的条件，包括四程情况：Cycling，Melt，Hold at Temperature，HRM step，详细说明请参见仪器手册： 上图是careHBV v2的反应条件，需要注意的是如何在Cycling中设置荧光信号的收集。点击“Acquiring to Cycling A”，在跳出的对话框中确保右边“Acquiring Channels”列表中有试剂使用说明书中明确要求的探针染料对应的颜色。不同染料对应的颜色信息可以参见下图；选择后点击“OK”按钮返回上一级图形界面； 点击“Save as”将反应条件保存在自己熟悉的文件夹目录下，或者直接点击“OK”返回上一级图形界面；注：保存好的程序文件以后在本界面下按“Open”按钮打开调用。 点击“Gain Optimisation”进入增益优化界面； 在对话框中点击“Optimise Acquiring”按钮，在新跳出的对话框中按“OK”确认，如果实验中有设置n个荧光信号通道，就需要确认n次OK；在 “Perform Optimisation Before 1st Acquisition”前打“√”确认。按“Close”返回上级图形界面，然后按“Next”进入下一步； 点击“Save Template”按钮，将本次实验条件保存为模板文件，以供以后调用。保存的路径默认为安装路径下的Template文件夹中。点击“Start Run”按钮，输入本次实验名确认后进行实验运行阶段的样本编辑界面。文件建议保存在桌面HBV文件夹下； 快速调用已存在的实验模板 进入程序软件后，可以看到前面保存的模板文件，直接双击打开或者点击“New”按钮； 选择本次实验所使用的转子，在“Locking Ring Attached”前打“√”确认，点击“Next”按钮； 点击“Next”按钮，直到进入最后一个界面，点击“Start Run”按钮，输入文件名后进入样本编辑界面； 样本编辑 在“Given Conc. Format”中选择自己喜欢的数字格式，在“Unit”中选择“IU/ml”为浓度单位。根据样品摆放的位置输入样本名称，将标准品的样品类型修改为“Standard”并输入对应的标准品浓度。 如果每次实验的样本名称及顺序是固定的，可以点击将本次实验中编辑好的样本顺序保存下来，以供以后调用。调用时在本页面下点击打开所保存的文件。 如果一次实验中包括不同的检测项目如CT/NG/UU等，可以点击Page下的“New”按钮为每个项目建立不同的页面，并为不同页面命名。结束后点击“Finish”按钮退出编辑界面。 如果点击了“Finish and Lock Samples”按钮，样本信息会被锁定。解锁方法如下图所示： 点击“Edit Samples”按钮，进入样本编辑界面，点击“Security”下的“Samples Locked”进入解锁。 实验结果分析 实验运行结束后，软件自动会跳出分析界面，如下图所示： 对于careHBV v2和careHCV v2两个项目，由于试剂采用了内对照进行假阴性样本的监测，实验中的Green及Yellow通道中都会有相应的数据，我们需要对这两个通道进行依次分析。 上述界面，点击“Auto Scale”按钮会将扩增曲线自动放大到与坐标相适应，以方便观察。 IC通道（Yellow）分析： 点击“Analysis”按钮，在跳出的对话框中双击“Cycling A. Yellow”或选中后点击“Show” 点击“Dynamic Tube”——“Slope Correct”，点击“Threshold”，并在曲线分析界面上任意处点击一下，红色阈值线就会出现在图形界面中，将该线调整到刚好盖过噪音线的位置即可。 对于图中的无规律样本，将鼠标移到对应的曲线上，可以显示出样本的位置和名称，请将这些无规律样本的名称记录下来以备用； FAM通道(Green)分析： 在些页面