浅谈发酵工艺中溶氧浓度光学检测的技术应用.doc

浅谈发酵工艺中溶氧浓度光学检测的技术应用 宋有星 辛亮 山东鸿基工业有限公司 摘要：微生物发酵中各工艺参数的过程检测与控制对于微生物的生长和产物形成有着重要的影响，发酵液中的溶氧浓度（Dissolved Oxygen ，简称DO）便是需氧菌发酵的必备条件和重要参数，发酵液的DO值对菌体生长、目标物的性质和产量都会产生不同影响，通过发酵液中溶氧量的变化，可以了解微生物生长代谢是否正常？工艺控制是否合理？设备供氧能力是否正常等？因此是生物产品质量过程控制的重要参数之一。本文中通过研究溶氧对发酵的影响与控制，结合当前常用的电化学溶氧检测方式，从风险控制角度浅谈发酵工艺中溶氧浓度的光学检测的技术应用。 关键词：溶氧、发酵、过程检测与控制 溶解氧（Dissolved Oxygen，DO）是指溶解在水或发酵液中的氧，溶解氧以分子状态存在于水或发酵液中。 水中溶解氧的含量受到两种作用的影响：一种是使DO下降的耗氧作用，包括耗氧有机物降解的耗氧，生物呼吸耗氧；另一种是使DO增加的复氧作用，主要有空气中氧的溶解，水生植物的光合作用等。这两种作用的相互消长，使水中溶解氧含量呈现出时空变化。 微生物发酵即是指利用微生物，在适宜的条件下，将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程，微生物发酵生产水平主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件。 微生物细胞在发酵过程中要进行上百个酶反应，并受到多种的因素的工艺参数影响，因此发酵过程非常复杂，若要实现药品质量的过程控制较化学合成方式要复杂的多。但随着对菌体的培养规律、菌体对环境条件的要求和代谢变化规律的创新研究，以及过程检测技术长足进步，通过适时检测控制发酵条件和微生物细胞代谢变化有关的各项工艺参数，可视的检测与控制整个发酵过程，使菌种的代谢变化按照我们所需要的条件进展，达到预期目的。 微生物发酵中各工艺参数的过程检测与控制对于微生物的生长和产物形成有着重要的影响，需要过程检测的大约有温度、压力、空气流量（需氧发酵的参数控制，影响氧或其他参数的传递）、浊度（适时反应细胞生长的状态）、PH值（依据试验条件获取的最适宜的PH值作为参照进行适时检测与调控）、浓度（适时检测发酵液中糖、氮等重要营养物质的浓度以及菌体或目标物浓度）、溶氧量（需氧菌发酵的必备条件和重要参数）等数十种工艺参数。 发酵液中的溶氧浓度（Dissolved Oxygen ，简称DO）便是需氧菌发酵的必备条件和重要参数，发酵液的DO值对菌体生长、目标物的性质和产量都会产生不同影响，通过发酵液中溶氧量的变化，可以了解微生物生长代谢是否正常？工艺控制是否合理？设备供氧能力是否正常等？因此是生物产品质量过程控制的重要参数之一。 一、溶氧量控制的作用： 溶解氧是发酵过程中至关重要的一个参数指标，对溶解氧控制的目的就是把溶解氧浓度值稳定在一定的期望值或范围内。对这些参数进行精确、实时在线测量是实现溶解氧自动控制的一个基本前提。 发酵中因受到生物反应器中多种物理、化学和微生物因素的影响和制约，溶解氧浓度与其它工艺参数的关系也变得极为复杂。在生物反应器内的质量传递主要为气-液传递和液-固传递。气-液传递主要是好氧发酵过程中的氧传递以及二氧化碳的释放，而液-固传递主要发生于反应系统中含固定化酶、固定化细胞、生物膜、絮凝细胞的过程。 大多数微生物发酵过程为好氧的，对于好氧发酵来说，溶解氧通常既是营养因素，又是环境因素。特别是对于具有一定氧化还原性质的代谢产物的生产来说，DO的改变势必会影响到菌株培养体系的氧化还原电位，同时也会对细胞生长和产物的形成产生影响。 发酵过程中溶氧量会随着菌体生长的不同阶段呈短暂曲线型变化，在发酵前期因菌丝大量繁殖，需氧量会大于供氧，溶氧出现短暂低峰，在生长与产物合成阶段，需氧量会逐渐减少，溶氧趋于稳定，但受补料等条件的影响，又会引起溶氧浓度的下降，发酵后期，由于菌体衰老，溶氧浓度又会逐渐上升，一旦菌体自溶，溶氧浓度则会呈现明显上升。整个发酵过程的是通过在线溶氧浓度检测和适时改变通气速率来实现自动化控制的，以便把溶解氧浓度值稳定在该菌体生长所需的可控期望值或范围内。 二、溶氧对微生物生长的影响 根据对氧的需求情况，微生物可分为好氧生物（通气发酵）和厌氧生物（静置发酵）。 好氧生物的发酵，只能在有氧的环境中生存，属于微生物中的一部分，好氧生物是把氧作为最终的电子受体，借助有氧呼吸获取生长所需的能量。它包括原核生物中的一部分细菌、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体；真核生物中的一部分真菌、藻类、原生动物 ；一部分非细胞类的病毒和亚病毒。此类微生物发酵过程中为促进生长，一般需要尽可能的提高溶氧。 厌氧微生物的发酵，如丙酮丁醇发酵、酵母菌的酒精发酵、乳酸发酵等。产生丙酮、丁醇的梭状芽孢杆菌（Clostridium）是