TGGE中文说明书.doc

这是 /Soft/ShowSoftDown.asp?UrlID=1SoftID=20 的 HTML 档。G o o g l e 在网路漫游时会自动将档案转换成 HTML 网页来储存。 Biometra TGGE中文说明书 应用学科：肿瘤学、微生物学、免疫学、RNA类病毒研究、群体分析、工业分析、蛋白质构想变化 专利：QIAGEN GmbH 垂直电泳主要用于分离条件的优化；平行电泳可提供样品的快速分析。? 1。手册的新内容 1)?thermal?coupling溶液的体积在电泳中是个临界因素，所以它的体积应保持尽可能的小。(section?6.3.2)? 2)?不需要用缓冲液覆盖胶。(section?6.3.2)? 3)?在将胶放置在block上后应立即覆盖the?gel?cover?film。(section?6.3.2)? 4)?在电泳中所有样品应保持一样的盐浓度。 5)?可用普通的海绵来代替缓冲液条。(section?6.3.2)? 6)?对于某些特殊胶推荐使用银染，银染时应戴手套，避免出现干扰条带。? 1.1安全指示/概述? 倒缓冲液时不能超过最大体积的标志。 在电泳开始前必须保证电泳单元的清洁（特别不能有缓冲液）；如果有缓冲液，请于电泳前擦净。 在无胶时绝对不能运行设备。 电泳模块上覆盖了一层聚四氟乙烯薄膜，要注意防止损坏这层薄膜。 在清洁模块时不能使用腐蚀性化学物质和去垢剂。 在电泳模块上不能使用石蜡油。 在安全盖下如果有溶液残留时，设备会停止运行，请清洁设备，然后重新启动。 在开启安全盖之前请关闭电源。 在设备运行当中请不要移动设备。 在移动电泳单元时，应扶住设备的下部（红色部分），而不是白色上部。 ? 2. 简介?2.1 原理 ????传统的分离蛋白质和核酸的电泳方法主要依据他们的分子量和电荷。TGGE则是依据生物分子的熔解性质的不同而进行分离的。分子的熔解性质是决定于生物分子的一级、二级和三级构象，并被一些外界因素如：温度、盐浓度和pH值所影响。 2.2? TGGE与之前的一些分析方法如DGGE相比主要优势如下： 高分辨率：温度梯度由微处理器控制，温度梯度线性极为严格，2mm的电泳距离最大可对应0.6℃的温差，即使分子间的差异极细微也可以检测出来。 温度梯度的高度重复性：易控制的电泳条件可保证电泳的重现性和结果的重复性； 加样量少。 ? ????在TGGE电泳中，样品在一个温度梯度下进行电泳。在一个高的温度下样品开始变性。如果样品是PCR片断时，电泳样品是双链DNA。在一定的温度时DNA开始接连，形成一个分叉状结构（一部分是双链结构，另一部分为单链结构），样品在电泳中的迁移速度就大大降低。因为分子的熔解温度依赖于分子序列，因此分子量相同但是序列不同的DNA片断就可以被分离出来。因此它可以用来鉴定PCR突变产物。TGGE不仅仅可以用来分离生物分子并且可以用来研究分子的熔解性质和稳定性。 ????垂直TGGE可显示DNA双链分离的温度点，用较窄温度范围（包含纯合双链和杂合双链TM值）的平行TGGE或垂直TGGE可进行进一步的分析。 ????分析多个样本时可使用平行TGGE，平行TGGE与SSCP分析有些相似，但对所有突变类型具有更高的分辨能力。对于不同的样本数可选用带有8，12或18加样齿的不同玻板。? 3．在电泳前需要做的准备工作 分析某个基因的多态性位点时，先使用合适的引物组合进行PCR扩增。多态位点应包含在扩增片断内，不应该处于扩增片断的末端。 第一步? 利用Poland核酸分析工具对dsDNA进行分析。该软件可用来分析引物设计是否合适，扩增片断的长度是否合适，还可用来估计电泳分离的温度参数。 ??????? 网址http://www.biophys.uni-duesseldorf.de/local/POLAND/poland.html ??????? 这一软件可以分析DNA、RNA的热学特性，预测它是否合适使用TGGE系统。 ??????? 如果分析结果是适合，进行第二步； ??????? 如果分析结果是不适合，请完善你的引物设计。 ??????? 永远不要进行TGGE实验，如果分析结果是不适合。 第二步? 进行垂直温度梯度电泳。 ??????? 如果垂直电泳的结果出现了明显的熔解曲线，就可以进行平行温度梯度电泳。 ??????? 如果垂直电泳的结果不理想，重新检查分子结构、缓冲液成分和电泳条件。 第三步? 进行平行温度梯度电泳。 ??????? 利用垂直温度梯度电泳得出的条件进行平行温度梯度电泳。? 4．TGGE Maxi 系统 4.1 系统概述 TGGE Maxi 系统包括三个部分： 电泳单元，包括模块，缓冲液槽和安全盖； 控制器，包括电压控制和温度梯度控制； 电源。