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第七章 酶工程基本原理 7－1 什么是酶？什么是酶工程？根据酶所催化的反应类型，可将酶分为几大类？ 答： 1.酶(enzyme)是生物体内活细胞所产生的一种具有特殊生物催化功能的蛋白质。由于酶来源于生物体，所以又称之为生物催化剂。 2.酶工程就是通过酶或微生物细胞，动植物细胞，细胞器等在一定的生物反应装置中，利用酶所具有的特殊生物催化功能，借助工程手段将相应的原料转化成有用物质并应用于社会生活的工程技术科学。它包括酶制剂的制备，酶的固定化，酶的修饰与改造及酶反应器等方面内容。 3.国际生物化学联合会酶学委员会(enzyme commission)根据酶所催化的反应类型，将酶分为氧化还原酶类(oxido-reductases)、转移酶类(transferases)、水解酶类(hydrolases)、裂解酶类(lyases)、异构酶类(isomerases)和合成酶类(synthetases)等6大类。 7－2 酶催化作用的特点是什么？ 答：酶作为一种特殊的催化剂，除了与一般催化剂共同具有“反应前后其量化学性质不发生改变”、“改变反应速度”、“不改变化学反应平衡点”外，还具有如下几个方面的特性。 1.极高的催化效率——酶的催化效率非常高，往往是其它无机催化剂（或有机催化剂）的106-1013 倍。 2.高度的专一性——酶的专一性是指酶对其作用的底物有严格的选择性，一种酶只能催化某一类，甚至某一种物质起化学变化。 3.要求反应条件温和——酶是由生物体产生，本身又是蛋白质。因此，酶的催化反应一般只能在常温、常压和接近中性的pH条件下进行。 4.活性调节机制复杂——酶的活力在生物体内受到多方面因素的调节与控制。生物体内酶与酶之间、酶与其它蛋白质之间存在着若干相互作用，机体通过调节酶的活性和量，控制代谢速度，以满足生命的各种需要。 7－3 影响酶活性的主要因素有哪些？ —71— 答：酶促反应速度受酶浓度和底物浓度的影响，也受温度、pH、激活剂和抑制剂的影响。 1.酶的浓度——在一定的温度和pH条件下，当底物浓度大大超过酶的浓度时，酶的浓度与反应速度呈正比关系；当酶浓度很高时，曲线逐渐趋向平缓。 2.底物浓度——对于一个给定的酶催化反应，当底物浓度[S]较低时，酶促进反应速度 V 随着底物浓度的增大(急骤)增大。 当底物浓度超过1/2Vmax 后，酶促进反应速度增幅逐步减小；当底物浓度增大到一定值后，酶促进反应速度不再与底物浓度有关。 3.反应温度——酶在其最适温度范围内活性最强，酶促反应速度最大。在适宜的温度范围内，温度每升高10℃，酶促反应速度可以相应提高1－2倍；当超过适宜温度后，酶将发生不可逆性变，使其催化作用散失。 4.pH值——酶反应介质的pH值会影响酶分子，特别是活性中心上必需基团的解离程度和催化基团中质子供体或质子受体所需的离子化状态，也可影响底物和辅酶的解离程度，从而影响酶与底物的结合。 只有在特定的pH条件下，酶、底物和辅酶的解离情况，最适宜于它们互相结合，并发生催化作用，使酶促反应速度达最大值，这种pH值称为酶的最适 pH(optimum pH)。 5.抑制剂——酶的抑制剂(inhibitor)能使酶的活性下降（不引起酶蛋白变性）。 6.钝化剂——酶的钝化剂（如：强酸、强碱等）可使酶变性失活。 7.激活剂——酶的激活剂能提高酶的活性（不引起酶蛋白变性）。 7－4 什么是辅酶？什么是辅基？ 答： 1.所谓辅酶是一类可以将化学基团从一个酶转移到另一个酶上的“有机小分子”，与酶蛋白的结合较为松散，可用透析法将辅酶透析出来 。 2.辅基可以是有机化合物，如糖类、脂肪和核酸，也可以是金属离子或金属配位化合物。辅基与酶蛋白是以共价键的形式结合，比较牢固。 7－5 生产中常用的酶的生产方法有哪几种？ 答：生产中常用的酶的生产方法有提取法、发酵法和化学合成法。 —72— 7－6 提取法生产酶的基本工序有哪些？ 答：提取法是通过物理化学方法，直接从动、植物组织中将酶提取，是最早采用并且一直沿用至今的一种方法。其基本工序可表述为： 7－7 什么是酶的固定化？常见的固定化方法有哪些？酶固定化有哪些主要优点？ 答： 1.所谓酶的固定化是指，用物理或化学方法使酶制剂固定化，把原来游离的水溶性酶限制在某一局部空间或载体上，使其可像一般固体催化剂使用。 2.生产中常见的酶固定化方法主要有：“载体结合法”、“包埋法”和“交联法”等。 ⑴载体结合法 载体结合法就是将酶结合在非水溶性载体上，制成固定化酶。载体结合法根据其结合方法又可分为物理吸附法、离子吸附法和共价结合法等。 ①物理吸附法——以吸附剂为载体，将酶或含酶的菌体吸附在不溶性载体上，使酶固定化。 ②离子吸附法——利用电性作用将酶与含有离子交换基团的水不溶性载体相结合，使酶固定化。 ③共价结合法