M01第一篇第一章 病毒.pptVIP

四、病毒的培养 (一) 病毒样品的采集与制备 病毒存在于动、植物病灶组织、体液、分泌物、粪便、下水污泥、活性污泥、污水、河水、湖水、海水等处。 固体病毒样品采得后，加液体培养基制成悬液，以10000 r/min 离心10 min，去除杂质，取其上清液备用。 液体病毒样品 直接以10000 r/min离心10 min，去杂质，取其上清液备用。 空气病毒样品采用真空泵抽取至长有宿主菌的平板上，或是将长有宿主菌的平板打开盖，在空气中暴露 30～60 min以收集。 若样品中病毒浓度大则要适当稀释，若样品中的病毒浓度小则要浓缩。 四、病毒的培养 (二)动物病毒的培养 1.动物病毒的空斑试验 (1)单层细胞的制备和培养：用无菌小刀将动物组织切成0.5～1mm3的小块，用平衡盐溶液(Hanks或 Earles)洗涤数次，加体积分数5％胰酶消化10～15min(有的消化时间长至30min，甚至十几小时)，将细胞间的“间质蛋白”水解，使细胞分散，将胰酶冲洗掉，吹散细胞并计数。加入含牛血清的生长液，分装，保持37℃温度，培养2～3d即长成单层细胞，以备培养病毒用。还可经传代后再培养病毒。 (2) 动物病毒的接种与观察 ① 将病毒悬液置于单层细胞的表面，经适当时间孵育，使病毒最大限度地吸附在宿主细胞上。