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CD133和CD34
CD133和CD34 CD133是一种独特的干细胞标志,分子量为120kDa,具有5个跨膜区,曾命名为AC133。2000年,在英国Harrogate举行的第7届人类白细胞分化抗原国际工作会议(7th International Workshop on Human Leucocyte Differentiation Antigens,HLDA7)上被正式命名为CD133。 CD133抗原可被3种CD133抗体识别:克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接与CD133/1糖基化抗原表位结合,可用于从外周血、骨髓、脐带血及其它组织中分析和分选CD133+细胞。单克隆抗体293C3和AC141识别抗原表位CD133/2,主要用于MACS分选后CD133+细胞的荧光染色。多数情况下CD133/1和CD133/2识别同种细胞,只是有表达强度的差别,但是在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)和某些急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)中发现CD133/1和CD133/2表达不同,或者正常表达强度紊乱。 造血系统中,CD133在35-75%的CD34+细胞亚群上表达,主要见于人类胎肝、骨髓、脐带血、外周血中CD34bright干细胞和前体细胞,包括CD34bright、CD38neg/dim、HLA-DRneg/dim、CD90+和CD117+细胞。此外,CD133也见于这些组织的一小部分CD34-细胞,在成熟的血细胞上不表达。与CD34抗原不同的是,CD133在晚期祖细胞,如前B细胞、红系集落形成单位(colony forming unit-erythrocyte, CFU-E)、粒系集落形成单位(colony forming unit-granulocyte, CFU-G)上不表达。最近发现CD133也表达于内皮前体细胞、胎儿神经干细胞和发育中的上皮细胞。(1)CD133分选在造血起始细胞研究中的应用 MACS分选后CD133+细胞功能性研究表明,CD133+细胞具有长期培养起始细胞(Long-term culture-initiating cells,LTC-IC)和长期重建造血细胞(Long term repopulation cells, LTRC)的能力,为最原始的造血细胞,移植给宿主后可以长期植活。此外,最近研究发现LTC-IC主要见于AC133+CD34+亚群,一小群CD133+/CD34-细胞也具有长期增殖潜能,故认为AC133为原始造血细胞群(包括CD34-细胞)标志。Rappold等所做的脐带血CD34和CD133分选研究发现同一份标本的CD34+细胞扩增潜能低于CD133+细胞。因此AC133分选可能优于CD34分选。(2)干细胞可塑性研究 CD133是一个高度保守的抗原,功能不清。为了研究CD133+细胞特性,Handgretinger等使用MACS技术纯化了G-CSF动员后健康成人志愿者的CD133+干细胞,纯度达到94%。加入Flt3/Flk2配体和IL-6体外培养纯化的CD133+细胞,6周后会出现粘附细胞群。这些细胞不表达CD34或者CD133,也不表达内皮细胞、间充质细胞、树突状细胞的标志。与干细胞因子(Stem cell factor, SCF)共同孵育后,非粘附细胞部分表达CD133,但是CD34阴性。这些非粘附的CD34-细胞在非糖尿病/严重联合免疫缺陷(Non obese diabetes/Severe combined immunodeficiency disease,NOD/SCID)小鼠体内高度植活。移植后NOD/SCID小鼠骨髓没有分选的单个核细胞或者CD133+干细胞会在第二受者体内植活。CD133+造血前体细胞可以产生CD133-CD34-粘附细胞群,这些细胞可以再形成在NOD/SCID小鼠体内有高度植活潜能的CD133+CD34-干细胞群,表明造血前体细胞具有可塑性。 Poznansky等使用MACS技术分选出骨髓AC133阳性细胞或者CD34阳性CD2阴性细胞,并使用三维空间结构重建胸腺环境,将分选后细胞在人造基质中培养,14天后研究发现可以重新生成T细胞(相当于人类胎儿胸腺细胞),并且逐渐成熟,具有功能。(3)表型分析 Buhring等使用MiniMACS分选骨髓AC133和CD34阳性细胞,然后进行免疫荧光检测。发现CD34+AC133+含有最原始的前体细胞和髓系前体细胞;CD34+AC133-细胞主要为B细胞和红系晚期前体细胞。0.2-0.7%AC133阳性细胞不表达CD34。AC133阳性细胞中,多数为AC133弱表达,0.1-0.7%AC133高表达。AC133弱表达细胞表型:CD71
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