1单细胞藻类的培养4-26.ppt

第四节 单细胞藻类的培养方法 五步法 容器和工具的消毒——培养液的配制——接种——培养管理——采收 一 容器和工具的消毒 目的：消灭藻类的捕食者和竞争者 方法： 物理消毒法： 高温高压灭菌 直接灼烧法 煮沸法 烘箱干燥法 紫外线消毒法 化学药品消毒： 70%酒精法 高锰酸钾法 漂白粉法（CaClO2） 稀盐酸法 石炭酸 洗液 二 培养液的配制 培养用水的消毒 培养液的成分 配方的选择和营养盐用量的计算 营养盐的添加 1 培养用水的消毒 加热消毒法 过滤除菌法 次氯酸钠消毒法 紫外线消毒 磁化水 2 培养液的成分 常量元素 包括N、P、Fe、K、Mg、S、Ca、Si等 微量元素 包括B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co、Ti、W、Cr、Ni、V、Cd、Sr等 辅助生长有机物 主要种类：维生素B12、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素H、叶酸、泛酸钙、葡萄糖、酵母抽出物、鱼粉等 缓冲剂 在培养液中起缓冲作用，常用缓冲剂有三羟基甲烷、二甘氨酸、EDTA。 植物生长激素 培养液中加入某些植物生长激素，如赤霉素，可以促进藻类细胞生长，用量为0.01-0.1mg/l。 藻类培养液制备与配方 根据培养液的性质，藻类培养液可分为无机培养液和有机培养液 配制无机培养液的原则 离子间相互平衡的培养液，称为生理培养液 在配制原液时，必须使各种盐类完全溶解，不发生沉淀，原液应该无色透明。 培养液的稀释水，在进行纯培养或科研时用蒸馏水，在大量生产培养时，用自来水或消毒的海、淡水。 在配制培养液时，配方中常量元素可直接称取或先配成母液后移取，微量元素通常先配成浓缩1000倍的母液后移取 有机培养液的配制 大面积培养小球藻或栅藻，主要用有机培养液 可用天然淡、海水配制培养液，天然淡、海水中已存在着植物必须吸收的各种营养成分，因此只需补充某些在培养中可能引起缺乏的营养元素即可。 尤其是大量生产中，往往只加入最主要的几种营养元素，可使用农肥、大草浸出液、污水、动物粪尿及食品加工废料等。 3 营养盐的添加 逐一加入营养盐，并在下一种营养盐加入之前进行充分搅拌 营养盐加入的顺序：先氮，后磷，再铁……，直至所有营养盐都按需加入到消毒水中 4 配方的选择与营养盐用量的计算 根据培养藻类对各种营养盐的需求选择适宜配方 F/2配方 NaNO3 74.8mg NaH2PO4 4.4mg Na2SiO3·9H2O 8.4-16.7mg F/2微量元素溶液 1ml F/2维生素溶液 1ml 海水 1000ml F/2微量元素溶液 ZnSO4·4H2O--------------------23mg MnCl2·4H2O-----------------17.8mg CuSO4·5H2O-------------------10mg Fe C6H5O7·5H2O----------------3.9g Na2MoO4·2H2O---------------7.3mg CoCl2·6H2O--------------------12mg Na2EDTA-----------------------4.35g H2O ---------------------------1000ml F/2维生素溶液 维生素B12-----------------0.5mg 维生素H------------------0.5mg 维生素B1----------------100mg H2O---------------------1000ml 采样 用25号浮游生物网在水水体中捞取水样 镜检 将采回的水样进行镜检，如果发现有需要分离的藻类，在水样中数量较多，可立即进行分离，若数量少，分离困难，就进行预备培养，待其数量增多后，再进行分离； 预备培养 用作预备培养的培养液，各种藻类是不同的，一般绿藻和硅藻的浓度应小一些，一般只有原配方的1/2、1/3或1/4。对一些难以培养的藻类一般要加入土壤浸出液。如果水样中藻类较多，就应该同时使用几种不同的培养液进行培养，使藻类在适合自己繁殖的培养液中进行生长繁殖 分离 微吸管分离法 趋向运动法 毛细吸管法 稀释分离法 平板分离法 获得单种培养后，就可以进行扩大培养。藻种的培养要求