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单基因座DNA图谱在法医学中的应用 ‘叶一 34一 展起来.最初法医学是以ABO血型系统作为手 段.六十年代人类遗传学家揭示了大量酶和其 它蛋白质的多态现象,于是测定酶与蛋白质的 多态性便成为法医学的另一种方法.结合血清 反应测定就可使犯罪证据接近个人特征,从而 为侦破案件提供依据.但是由于样品中蛋白质 极不稳定,若样品采自作案数星期后的现场,这 几种方法均失效.八十年代法医学进展中提出 在样品DNA非编码区可能找到反映个人特征 的线索,于是开发了单基因座DNA图谱,从而 能可靠地帮助债破案件.目前此法已在世界范 围的法医实验室中广为应用. 分子生物学的进展,特别是染色体定位的 进展,使人们发现DNA的非编码区内有高变 区.Leicester大学的AlecJeffreys教授发现这 这种高变区具有个人特征,这便是DNA用于法 医学的起点.他将非编码区内的高变区比作”微 O●O…●OO●o…D●OO●…OO●…O……O●Oo● 骨细胞前体细胞(可能是基质细胞)在E消失 时可反应性地分泌IL一6,从而促进破骨细胞增 生. 虽然体外细胞培养证明E的主要作用是 作用于成骨细胞和基质细胞,调控IL一6的分 泌,但并没有说明事件的全过程.显然E还影 响PBM及类似细胞对IL.1和其它细胞因子的 分泌.雌激素的这两种不同效应可以殊途同归: E的消失导致PBM产生的IL一1,TNF-a增多, 而IL一1,TNF-a可使成骨细胞产生IL-6的量增 加或者同时作用于PBM和成骨细胞,而 PBM和成骨细胞各自独立发生反应. 上述一系列研究的重要意义在于:E的抗 骨质疏松效应得到了合理的解释,即能与骨 细胞相互作用,对控制骨质再形成的细胞因子 }22{e 《生命的化学H994年l4卷第4期 码区的许多部位上检出.每个微型卫星含有一 定的核昔酸顺序,这种顺序重复若干次而形成 重复子,几个重复子串联在一起,形成串联重复 子,其重复次数愈多,微型卫星便愈长.对某一 微型卫星中重复子的重复次数则因人而异,故 又称为”可变数串联重复子”(variablehumher tandemrepeats,即VNTRs). 在测定镦型卫星即vNTRs的系统中, DNA被酶切成片段,然后用标记探针检出含有 串联重复子的片段.起初的方法是同时检出若 干个微型卫星的多基因座DNA图谱,但后来法 医学家都选用了单基因座DNA图谱,因为单基 因座DNA图谱可以用于研究特异性微型卫星. 单基因座DNA图谱包括DNA抽提,限制性内切 酶消化,电泳分离印迹上膜,及标记探针检出等 几个步骤,但这几个步骤用于法医学时则具有 法医学检测的特点,适应法医学检出的要求.现 ●O…●O…0●O…D●……O…0●O……O●…0 阿络进行调节.在E充足时,E作为支配因 子,降低细胞因子的产生,因而降低了破骨细胞 的形成率与活性,从而维持正常的骨形成.在 E缺乏时,E的支配地位不复存在,细胞因子 分泌增加,导致破骨细胞形成增多,骨质再吸收 加剧.虽然有关靶细胞确定,各因子相互作用顺 序和特异性细胞因子功能定性等多方面的问题 尚未有一致意见,但有关骨质分子调控的研究 已有了良好开端.另外,体内细胞因子浓度的测 定有可能用作诊断工具,从而监控骨质疏松.干 扰细胞因子活性的药物如IL一1受体拈抗剂有 可能成为治疗骨质疏松症的新手段. (宝福凯编译自[-Iorowitz,M.C.Science, 1993,260:626—627) (本文1994年3月28日收到) 啸 R 朗一椭李一学～一在型普图跋 翌耙 谒 _ 《生命的化学}]994年l4卷第4期 说明如下: 从犯罪现场取得的细胞材料,如血液和精 子,通常其量较少.故抽提DNA需保证获得最 高产量.抽提方法用经典的苯酚/氯仿法,抽提 过程中需自始至终保持pH在7.8.在侦查强奸 案件中的法医学检测情况比较复杂.由阴道所 采得的化验标本中含有强奸犯的精子和被害者 阴道表皮细胞,一般采取化验标本在sDs/蛋白 酶K混合藏中保温的方法,使阴道表皮细胞因 溶胞作用而破坏,而精子的细胞核含有交联的, 含硫丰富的蛋白质,故不会破坏.去除阴道表皮 细胞,甩离心法收集精子细胞核.然后用SDS/ 蛋白酶K/----硫苏糖醇混合液处理,可溶解精子 的细胞核,用酒精沉淀.再甩苯酚/氯仿抽提,可 得精子的DNA.为了得到法医学上有意义的 DNA片段,所用的限制性内切酶必须加以选 择,用预先设计好的方法来进行酶切.欧洲的法 医学家选定Hinfl酶,该酶可以在所需微型卫 星的旁侧区切断DNA,而美国法医学家则选用 HaellI酶.不管选择哪种限制性内切酶,都必 须使切出的DNA片段大小在1—2Okb左右,足 以包含VNTR区.DNA片段的分离采取琼脂糖 凝胶电泳分离法,所设计的琼脂糖电泳