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菠菜叶绿素的浸提和协同萃取反应洪法水3(苏州大学生物科学系苏州215151)魏正贵赵贵文(中国科技大学化学系合肥)摘要比较了不同有机溶剂用直接浸提法和Arnon法从菠菜叶片中提取叶绿素的效率.结果表明,用丙酮、乙醇浸提法提取叶绿素的效率比丙酮、乙醇Arnon法高,甲醇、乙醚浸提法提取叶绿素的效果明显不如丙酮、乙醇,而丙酮与乙醇等摩尔混合液浸提又比丙酮、乙醇液单独浸提的效率略高.对这种混合浸提现象的研究表明,在分配比为最大(Dmax)时的乙醇浓度与混合液的总摩尔比为015、协萃系数R为1185,认为用丙酮与乙醇混合液提取叶绿素存在协同效应,并且在两者等摩尔混合提取时效果最好.丙酮、乙醇及两者混合后与叶绿素的配位比均是1∶1.关键词叶绿素,菠菜,有机溶剂,萃取中图分类号:O614文献标识码:A文章编号:100020518(2001)0720532204植物叶片叶绿素含量与光合速率、植株生长速率有一定的相关性1.实验研究中常测定叶绿素含量以表征植物生长状态,生产中也往往根据叶色变化作为看苗诊断和采取施肥的重要指标2.长期以来,人们都应用Arnon法3测定叶绿素含量,利用叶绿素溶于有机溶剂的特性,将叶片在80%丙酮溶液中研磨提取,经过滤或离心后,用分光光度计测定叶绿素提取液的光密度值(OD),根据Lamber2Beer定律计算叶绿素含量.但Arnon法由于需要研磨和去残渣,对于田间实验大量样品的测定和大量叶绿素的提取带来很大的困难,而且,由于研磨和过滤时间较长,客观上又难以做到避光操作,会引起提取液中离体叶绿素作了研究,并对萃取反应机理进行了初步探讨.11.1实验部分仪器与试剂岛津UV2160紫外可见分光光度计.丙酮、乙醇、甲醇、乙醚、正己烷均为分析纯.1.2实验方法不同有机溶剂提取叶绿素:将从市场采购的菠菜洗净,除去叶脉,剪碎、混匀,称菠菜叶2g放入棕色试剂瓶中,加入60mL下列有机溶剂:丙酮,乙醇,甲醇,乙醚.n(丙酮)∶n(乙醇)=1∶1混合液,浸泡至发白,用UV2Vis测定光吸收,每隔24h测1次,测5次后,光吸收不再增加,计算叶绿素含量,并在350～700nm光波段扫描吸收光谱.同时称菠菜叶2g按Arnon法用丙酮或乙醇研磨并定容至60mL,过滤后测定光吸收,计算叶绿素含量6.比较不同有机溶剂、直接浸提法和Arnon法提取叶绿素的效率.混合液提取叶绿素:称菠菜叶2g放入棕色试剂瓶中,加入60mL不同摩尔比的丙酮和乙醇混合液.浸泡至发白,用UV2Vis测定光吸收,每隔24h测1次,测5次后,光吸收不再增加,计算叶绿素含量,并在350～700nm光波段扫描吸收光谱.丙酮、乙醇和正己烷混合提取叶绿素:称菠菜Hiscox等4素的光分解,造成误差.用二甲亚砜(DMSO)直接浸提植物叶片中的叶绿素,再测定光密度值.此法虽然省略了Arnon法中研磨和去残渣两项步骤,但需要在65℃的较高温度下提取,DMSO又有难闻的臭味,且作为计算叶绿素含量的光谱吸收峰有一定后移,沿用Arnon法公式计算必然存在一定误差.Lichtenthaler等5提出了用甲醇、乙醇、乙醚等有机溶剂的测定方法和计算公式,对Arnon法提出了修正.为了探讨最大限度的从植物叶片中提取出叶绿素并能尽量避免光分解,而且又适合大量样品的测定、大量叶绿素提取的可能性和科学性,本文在前人工作的基础上,对不同有机溶剂及其混合液提取菠菜叶绿叶2g放入棕色试剂瓶中,加入50mL不同摩尔2000208220收稿,2001202227修回国家自然科学基金和苏州大学人才引进基金资助课题第7期洪法水等:菠菜叶绿素的浸提和协同萃取反应533比的丙酮、乙醇和正己烷混合液.浸泡至发白,用UV2Vis测定光吸收,每隔24h测1次,测5次后,光吸收不再增加,计算叶绿素含量.上述每次测定重复3次.从表中看出,丙酮、乙醇Arnon法与丙酮、乙醇浸提法提取叶绿素的效率有显著差异,直接浸提法明显高于Arnon法(高21%～38%).这可能就是Arnon法在研磨、过滤时离体叶绿素易被光破坏所致7.甲醇、乙醚浸提法提取叶绿素明显不如丙酮、乙醇的效果.而丙酮与乙醇等摩尔混合浸提又明显比丙酮、乙醇单独浸提的效率高(高39%),这种混合浸提效应可能是一种协萃现象.2结果与讨论2.1有机溶剂提取菠菜叶绿素效率的比较不同溶剂提取菠菜叶绿素的效率列于表1.表1不同溶剂浸提法及Arnon法提取叶绿素效率比较(106mol?L)Tab.1ExtractionefficiencyforchlorophyllbysoakingmethodandArnonmethodbyusingdifferentsolvents(106mol?L)Chlorophyll2aChlorophyll2bSolventsandmethodC