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食品安全检测技术 课程实习 1、用高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸（13号上午） 一．实验目的 通过对高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸,掌握采用高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法. 二．实验原理 苯甲酸是食品行业通用的防腐剂，据科学报道，目前影响我们食品安全的最大问题是食品腐败和微生物的繁殖，正是由于食品中使用了防腐剂，而使我们避免了更多食品中的不安全因素。面粉中添加了增白剂最终转化成的苯甲酸不超过60ppm，我国GB2760－1996《食品添加剂卫生使用标准》中规定，苯甲酸在酱油、醋中的最大使用量为1000ppm，葡萄酒中为800ppm，碳酸饮料中为200ppm。 苯甲酸是我国目前最常用的食品防腐剂，其主要作用是防止由微生物的活动而引起的食品变质。 其分子式为： 本实验以汽水为样品,超声除去二氧化碳,调PH至中性,过滤后进入高效液相色谱,经反相色谱分离后,根据保留时间和峰面积进行定性和定量。 三．仪器和试剂 1．高效液相色谱仪，VWD（254nm）检测仪。 2．色谱柱：C18 3．超声波发生器或水泵(用于过滤或排气) 4．注射器：50微升 5．容量瓶：100ml若干 6．移液管：2mL、4ml、8ml 7．流动相：甲醇：乙酸+乙酸氨（PH=3.5）=60：40，制备前，先调节水(用酸或缓冲盐)的PH=3.5，进入系统色谱前，用超声波发生器或水泵脱气。 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 160 mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6 mg碳酸氢钠，用20 mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱保存。 5、可选用由以上试剂配置的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。 （二）仪器 1、分光光度计或相应的农残快速检测仪； 2、天平（0.01g）； 3、恒温水浴或恒温培养箱。 四、实验步骤： 1、样品处理 选取有代表性的蔬菜样品，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，冲洗掉表面泥土，剪成1 cm左右碎片。取样品1 g，放入烧杯或提取瓶中，加入5 mL缓冲液，振荡1~2 min，倒出提取液，静置3~5 min，待用。 2、对照溶液测试 先于试管中加入2.5 mL缓冲液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色剂。摇匀后于37 ℃放置15 min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.1 mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入比色皿中，记录反应3 min的吸光度的变化值ΔA0。 3、 样品溶液测定 先于试管中加入2.5 mL样品提取液，其他操作与对照测定相同，记录反应3 min的吸光度的变化值ΔAt。 五、结果计算： 抑制率（%）= 式中 ΔA0——对照液反应3 min吸光度的变化值； ΔAt——样品溶液反应3 min吸光度的变化值。 六、实验结果判断： 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50% 时，表示样品中有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。 检验结果记录： 样品名称 ΔA0 ΔAt 抑制率（%） 检验结果 七、实验注意事项及说明 1、对检验结果阳性的样品，需用其他方法进一步确定残留农药的种类和进行定量测定。 2、酶抑制率法对部分农药的检出限为： 农药名称 检出限（mg/kg） 农药名称 检出限（mg/kg） 敌敌畏 0.1 氧化乐果 0.8 对硫磷 1.0 甲基异柳磷 5.0 辛硫磷 0.3 灭多威 0.1 甲胺硫 2.0 丁硫克百威 0.05 马拉硫磷 4.0 敌百虫 0.2 乐果 3.0 呋喃丹 0.05 3、葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。 4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试的吸光度变化 ΔA0在0.3以上为准。注意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。酶的活性不够和温度太低都可能造成胆碱酯酶空白对照液3 min的吸光度ΔA0变化值＜0.3。 该法适用于大量蔬菜样本的筛检，不适用于最后的仲裁检测。 3、火腿中亚硝酸盐的测定（16号下午） 1检验原理 GDYQ—901SC2食品亚硝酸盐快速测定仪的原理是基于被测样品中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成稳定化合物，再与N-1-萘基乙二胺作用生成紫红色络合物对可见光有选择性吸收,可在仪器上直接显示出被测样品