植物基因组dna提取试剂盒原理简介试剂盒特点注意事项.pdfVIP

DNA DNA 植物基因组DDNNAA提取试剂盒 一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50次（SG071） 100次（SG072） 缓冲液SP1 室温 20ml 40ml 缓冲液 SP2 室温 10ml 20ml 缓冲液SP3 室温 20ml 40ml 15ml 15mlX2 漂洗液PW 室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNaseA（10mg/ml） -20℃ 200ul 400ul 洗脱缓冲液EB 室温 10ml 20ml 吸附柱 室温 50个 100个 收集管（2ml） 室温 50个 100个 说明书 室温 1份 1份 12 12 1122 。 本试剂盒在室温储存 个月不影响使用效果 注意事项 1． 第一次使用前请先在漂洗液PW中加入4倍体积无水乙醇（试用装加12ml无水乙醇），充分混匀，加入 后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2． 溶液SP1和SP3低温时可能出现沉淀和析出，可以热水温浴重新溶解后使用。 3． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化或pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 二、原理简介 4．本试剂盒采用高效的缓冲液系统对样品进行裂解消化后，通过沉淀、离心首先去除大部分蛋 白质，在高盐低pH的条件下DNA 能够与硅胶膜特异性结合，经过漂洗，蛋白质和其他杂 质被最大限度除去，最后在低盐高pH条件下洗脱得到高纯基因组DNA。实验过程中不需酚、 氯仿等毒性有机溶剂抽提和乙醇沉淀等步骤，提取的DNA纯度更高，适用于PCR、酶切等 下游试验。 三、试剂盒特点 1．离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复 性好。 2．不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 3．快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 4．提取得基因组DNA 纯度高，OD260/OD280在1.7～1.9，长度可达23kb-50kb，可直接 用于PCR 和各种酶切反应。 四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！） 1．所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000rpm的传统台式离心机，如 Eppendorf5415C 或者类似离心机。 2．不同来源的植物组织材料中提取的DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量 可达3-25μg。 3．DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl， 1mMEDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 五、操作步骤 1．取植物新鲜组织100mg在液氮中研磨至粉末状，加入400ul缓冲液SP1，4ulRNAaseA， 迅速振荡混匀，室温放置10分钟。 2．加入130ul缓冲液SP2，充分混匀，13000rpm离心5分钟。 3．取上清（大约400ul）加入到另一1.5ml 离心管中，加入等体积缓冲液