一种适合msap分析谷物干种子的dna提取方法an-山东农业大学.pdfVIP

山东农业大学学报 自然科学版( ),2014,45(5):660-664 VOL.45NO.52014 JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScienceEdition) doiL10.3969/j.issn.1000-2324.2014.05.005 一种适合MSAP分析谷物干种子的DNA提取方法 许 殊 重庆工贸职业技术学院生物化学工程系 重庆, 408000 (MSAP) DNA DNA MSAP 摘 要: 甲基化敏感扩增多态性 是 甲基化的主要研究技术，获得高质量的 是 分析的基础。 针对玉米Zeamays(L.)等干种子富含多糖、蛋白质且与核酸结合紧密等特点，采用改良的CTAB-SDS法对其基因组 总DNA 进行提取，对 DNA 进行质量检测，使用限制性内切酶EoRI和HpaII酶切，进行MSAP分析。结果表明， CTAB DNA OD260nm/OD280nm 1.86 OD260 改良 法可从玉米等干种子中获得纯度高、完整性好的总 ，其 处于 ， nm/OD230大于2.00，产率达1.8μg/mg，多糖、蛋白质和RNA等杂质被去除干净，无降解现象，所提取的DNA可 被等限制性内切酶完全双酶切，进行MSAP分析得到大量清晰稳定的多态性条带。结果表明改进的CTAB-SDS法更 适合于干玉米种子高质量总DNA 的提取。 ; ;DNA ;MSAP 关键词: 玉米种子 胚 提取 中图法分类号:Q781 文献标识码:A 文章编号:1000-2324(2014)05-0660-05 AnEfficientDNAExtractionMethodforMSAPAnalysisonthe DryCerealSeeds XUShu ChongqingIndustryTradePolytechnic College,Chongqing408000,China Abstract: Methylation sensitive amplificationpolymorphism (MSAP) is the main technology of DNAmethylation and to obtainhighqualityDNAisthebasisoftheMSAPanalysis.ThedryembyosofZeamay(L.)seedsarerichinpolysaccharides, protein and closely bind to nucleic acid preventing DNA extraction. The genomic DNA of maize seed was extracted by improved CTAB-SDSmethod andDNAquantitywas checked.DNAsampleswere digestedby restriction enzymesEcoR I andHpa II andMSAP analysis.Theresults showedtha the genomicDNAwas pure andintegralwithou polysaccharides, protein, RNAanddegradation.A /A ofthe obtainedDNAsolutionwas 1.86andA /A ratioswas greaterthan2.00. 260 280 260 230 Theproduction rate was 1.8μg/mg.The total DNAcanbe digested