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第”卷第1l期 水 产 科 学 v01．27N。．1l 2塑墨生!!且 旦墨旦量娶里堕一蔓生!量堕g量 一盟盟!至盟墨 利用eDNA—AFLP技术筛选与海胆数量 性状相关显著的分子标记 邹林林1”，周遵春2，董颖2，闰喜武1 (1．大连水产学院生命科学与技术学院，辽宁大连116023；2，辽宁省海洋水产 科学研究院，辽宁省海洋环境监测总站，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室， 辽宁大连116023) 摘要：以光棘球海胆(辛)×中间球海胆(6)的F。代为材料，利用eDNA—AFLP技术，采用单因素方 差分析方法，对与海胆壳径、体质量和生殖腺质量等主要经济性状相关的分子标记进行筛选，并对这些 数量性状与分子标记的相关性进行分析。结果表明，10对引物共筛选出与壳径、体质量、生殖腺质量显 23个；与3个数量性状相关显著的分子标记贡献率分别为7．62％一12．48％、8．02％一14．15％和 13．39％一32．26％。 关键词：光棘球海胆；中间球海胆；杂交；eDNA—AFLP；单因素方差 中图分类号：$968．9 文献标识码：A 文章编号：1003—1111(2008)11-0561-05 光棘球海胆(Strongylocentrotusnudus)和中间 笔者对光棘球海胆早与中间球海胆6单对杂 球海胆(S．intermedius)均属棘皮动物门、游在亚门、交产生的F。代群体体质量、壳径和生殖腺3个数量 海胆纲、正形目、球海胆科…，是我国北方沿海地区 性状进行了eDNA—AFLP分析，以期研究分子标记 2个重要的增养殖品种。国内有很多关于2种海胆 与数量性状的相互关系，找出与海胆数量性状相关 育种的研究报道[2剖，直接利用杂交优势和杂种F。 显著、且贡献率较大的eDNA—AFLP标记，为海胆 代进行苗种培育的也有报道【5J，但利用分子标记进 分子标记辅助育种提供参考依据。 行辅助育种目前尚处于初始阶段。本试验目的在 1材料与方法 于通过单因子方差分析，筛选出与海胆经济性状相 1．1材料 关的标记，进行分子标记辅助育种以提高选择的准 试验材料为2005年lO月配成的单对种间杂 确性和效率。 交(光棘球海胆9×中间球海胆6)的F。代一龄海 Bachem等阳1发明的cDNA—AFLP技术是研究 胆，样本数量为56个，样本表型测量情况见表l。 基因表达的一项新技术，具有重复性好、稳定、可靠 1．2试验方法 的特点，可对生物体转录组进行全面、系统的分析， 1．2．1总RNA提取及cDNA合成 广泛应用于基因表达特性研究、遗传标记分析和基 取杂交海胆的F。代个体，按说明书用RNAiso 因分离等方面。该技术是鉴定未知基因的重要手 段，已经成功鉴定了玉米、向日葵、百日草基因圳。 处理纯化。纯化后用1％非变性琼脂糖凝胶和Op． 与DD—PCR相比，cDNA—AFLP技术更适合差异 tizen2120 uV紫外／可见分光光度计检测RNA纯 表达基因的分离【l01。Breyne等¨¨利用eDNA—