古代养生汉方常用中药提取物的抗氧化研究.docVIP

古代养生汉方常用中药提取物的抗氧化实验研究 中国多肽产业集团 武汉肽类物质研究所 武汉多肽抗衰老研发有限公司 唐良艳 姜波 【摘要】目的与方法 采用DPPH?法和还原能力测定法测定了古代养生汉方常用23种中药提取物的抗氧化能力，并同VitC做了比较。结果 不同的中药提取物抗氧化能力不同，23种中药提取物对DPPH?自由基的清除能力和还原能力均呈量效关系，其中葡萄籽提取物的抗氧化能力最强，与VitC的抗氧化能力一致。 【关键词】养生汉方；还原能力；中药提取物；抗氧化能力；DPPH· 本文选取了23种古代养生汉方常用中药提取物，并用DPPH·法和还原能力测定法两种方法对这23种中药提取物的抗氧化能力进行测定。 一、材料 1.1 原料：23种天然植物提取物(由武汉天天好生物制品公司提供)、VitC（市场购买。） 1.2 仪器：722N型可见分光光度计(上海精密仪器有限公司)、KQ－50超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)、电子天平(奥豪斯)、80-1型沉淀离心机、恒温水浴锅（黄骅市新兴仪器厂）、容量瓶、具塞试管等。 1.3 试剂：DPPH·(二苯代苦味酰自由基、2，2－Diphenyl-1-picry-hydrazyl)购于SIGMA，10%三氯乙酸(TCA)、1%铁氰化钾、0.1%三氯化铁、0.2mol/L pH6.6磷酸缓冲液、其他试剂均为分析纯。 二、实验方法 2.1 通过DPPH·法比较23种中药提取物的抗氧化活性 2.1.1 方法： 参考Shimada的方法，测定清除DPPH实验上所采用的 DPPH甲醇溶液为紫兰色517 nm下有强的吸光值，若与试样结合，将会降低吸光值，由此藉以判断试样清除DPPH自由基的能力，其吸光值愈低，表示试样清除DPPH自由基的能力愈强mL一定浓度的试样溶液，分别加入新鲜配制0.4mM DPPH甲醇（无水乙醇）溶液1mL，呈深紫蓝色，混合均匀，反应10分钟。以分光光度计在517nm波长下测定其吸光。0→DPPH?与溶剂混合液的吸光度 A1→DPPH?与样品反应后的吸光度 A2→样品与溶剂混合液的吸光度 2.2 23种中药提取物还原能力的测定 2.2.1 方法： 还原力的测定是参考Oyaizu的方法，其原理即试样将赤血盐﹙K3Fe (CN)6﹚还原成黄血盐﹙K4Fe (CN)6，黄血盐再与Fe3+作用，生成普鲁士蓝，在700 nm波长测定吸光值，以检测普鲁士蓝生成量，作为试样的还原力，吸光值愈高，表示试样还原力愈强。K3Fe (CN)6 + Sample ( ( K4Fe (CN)6 + Sample-oxide 3K4Fe (CN)6 +4 Fe3+ ( ( Fe4 [Fe (CN)6] 3 + 12K+ 2.2.2 样品还原能力的测定 取一定浓度的样品(1～10mg/ml) 0.1ml，加人2.5m1 pH6.6的磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)和2.5ml 1%的铁氰化钾溶液，混匀，在50℃保温20min后加人2.5ml 10%的三氯乙酸，混合后以3000r/min离心10min。取上清液2.5ml，加2.5ml蒸馏水和0.5ml 0.1%的FeCI3，室温放置10min后，在700nm波长处比色，比色值越大，还原能力越强。 三、结果 3.1 23种中药提取物对DPPH·自由基清除能力 分别配制浓度为20ppm、100ppm、200ppm的中药提取物，测定其对DPPH·自由基清除能力SA%，结果如表1： 表1 23种中药提取物对DPPH?的清除率的比较 中药提取物 不同浓度(ppm)样品的 DPPH?自由基清除能力SA% 200 ppm 100 ppm 20 ppm VitC 100 100 100 葡萄籽提取物 100 100 100 枳椇子提取物 89.9 90.5 37.1 银杏黄铜 89.6 90.1 57.2 红花提取物 89.9 64.8 15.2 丹参提取物 88.7 86.8 21.3 红景天提取物 87.4 83.2 45.3 银杏叶提取物 86.9 62.7 21 甘草提取物 79.5 54.3 17.8 淫羊藿提取物 78.4 76.7 17.8 刺五加提取物 71.7 43.8 21.1 山楂提取物 69.5 50.6 19 熟地黄提取物 58.2 33 12.6 石斛提取物 51.2 30.6 7.5 芦根提取物 39.3 26.9 2.9 黄芪提取物 37.6 15.3 3.9 枸杞提取物 25.9 13.3 -- 柴胡提取物 16.7 9.4 4.7 葛根提取物 17.3 2.8 4 当归提取物 15 7.5 2.3 阿胶提取物 12.9 6.5 -- 天门冬提取物 9 3 4.3