高温胁迫下不同品系龙须菜的生理生化响应及蛋白质组学研究.pdfVIP

要 龙须菜是一种重要的大型经济海藻，在我国东南沿海大规模养殖，但夏季南方海区 水温高，缩短了龙须菜的养殖期。因此了解龙须菜在高温胁迫下的生理生化响应及开展 龙须菜耐热机制研究对龙须菜耐高温品种的选育具有重要意义。本文以龙须菜品系 981 和07-2 为材料，设置25 ℃，30℃和35℃ 3 个温度梯度培养龙须菜，进行了短时胁迫48h 内龙须菜生长率，光化学效率，藻胆蛋白，可溶 蛋白等生理生化指标响应的研究，并 进一步研究了在高温 35℃下981 品系和07-2 品系的蛋白质组学及主要响应蛋白热激蛋 白HSP70 的表达变化，为探索龙须菜的耐热机制和培育耐高温新品种提供理论研究基 础。 本文主要研究结果如下： 1.在 25 ℃，30℃和35℃ 3 个温度下培养龙须菜48h，测定了龙须菜的生长状况及生 长率。结果表明在25 ℃和30℃胁迫48h 后，两品系藻体颜色和形态没有明显变化，且都 维持一定的生长率。但在35℃条件下，981 品系藻体开始发绿泛白，而07-2 品系藻体颜 色仍呈红色。在35℃条件下，两品系的生长率都呈负增长，而 981 品系生长率较 07-2 品系更低。 在高温35℃胁迫条件下，两品系间光化学效率，藻胆蛋白及可溶 蛋白的变化差异 显著。在35℃条件下随胁迫时间的延长，981 品系的Fv/Fm 逐渐下降，胁迫48h 时藻胆 蛋白含量显著低于对照；而07-2 品系在48h 时Fv/Fm 才出现下降，藻胆蛋白含量与对照 无显著差异。35℃胁迫12-48h 期间，981 品系的可溶 蛋白含量逐渐下降，而07-2 品系 的可溶 蛋白含量先升高后降低，胁迫24h 时，07-2 品系可溶 蛋白含量是981 品系的 211.20%。这些结果表明高温下龙须菜的生理生化指标产生了应激反应，07-2 品系表现 出更强的耐热 。 2. 对高温胁迫下不同品系龙须菜进行了蛋白质组学分析。结果表明：采用11cm 胶 条，pH4-7，上样量为800 g，分离胶浓度为12%的双向电泳条件可获得背景清晰，分辨 率好的二维电泳图谱。高温胁迫下龙须菜的二维电泳图谱经PDQuest 软件分析后结果显 示981 品系在高温胁迫下共有25 个蛋白点发生差异表达，经质谱鉴定和数据库搜索，得 到10 个已知功能的蛋白质，主要是代谢相关蛋白，光合作用相关蛋白和热激蛋白；07-2 I 品系在高温胁迫下共有27 个差异蛋白点，经质谱鉴定和数据库搜索，得到 12 个已知功 能的蛋白质，主要是代谢相关蛋白，光合作用相关蛋白，蛋白质合成相关蛋白和胁迫应 答相关蛋白，以及未知功能蛋白。 981 品系与07-2 品系共有的差异蛋白在高温下的表达变化不同。如与碳代谢相关的 α-1,4 葡聚糖裂解酶，在两个品系中都表达下调；而与蛋白质合成相关的蛋白质二硫键异 构酶，与光合作用相关的加氧酶增强子及热激蛋白HSP90 和HSP70 在两个品系中都表 达上调。但981 品系中磷酸丙糖异构酶表达量下调，而在07-2 品系中无差异表达。981 品系的亲环素蛋白下降，延伸因子无差异表达；而07-2 品系的亲环素蛋白表达上调，延 伸因子先下调后上调。这些蛋白表达量的不同变化可能与龙须菜两品系的不同耐热 相 关。此外，质谱鉴定出的热激蛋白HSP70 经Blast 比对，结果显示HSP70 蛋白家族定位 于不同的细胞器，包括细胞质和叶绿体等。用 Western bloting 方法进一步验证细胞质 HSP70 在高温下的表达变化，结果与蛋白质组学分析一致。 3.采用RACE 技术首次克隆了龙须菜叶绿体热激蛋白HSP70 基因的1509 bp 的部分 序列，经过比对及序列分析，发现它具有HSP70 的家族标签序列，并且与细基江蓠繁枝 变种叶绿体的Dnak 同源 最高。同时，采用实时定量PCR 技术研究了981 品系和07-2 品系叶绿体HSP70 基因在高温下的表达变化，结果显示两个品系的叶绿体HSP70 在高 温下均呈现先上升后下降的趋势，但07-2 品系的表达量始终高于981 品系。这提示叶绿 体HSP70 等热激蛋白高表达可能是龙须菜07-2