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精品论文 参考文献 APN-1在糖尿病牙周炎昆明系小鼠牙周组织中的表达 1天津市第一中心医院，天津 300052；2天津医科大学口腔医院，天津 300052 目的：检测脂联素在糖尿病牙周炎昆明系小鼠牙周组织中表达的变化及对牙周组织病理形态及预后的影响，从而为临床糖尿病伴有牙周炎的患者治疗提供理论依据。方法：60只3周龄的昆明系小鼠按不同造模方式分为三组：对照组（20只），糖尿病组（20只），糖尿病+牙周炎组（20只），建立小鼠糖尿模型和小鼠牙周炎模型。分别通过与ELSA法、RT-PCR、western lot检测三个实验组小鼠的牙周组织脂联素基因和蛋白的表达变化的含量。结果：造模后20天，糖尿病组及小鼠血糖、空腹胰岛素水平（Fins）及胰岛素抵抗指数始终大于正常值，与空白对照组相比差异具有统计学意义(Plt;0.05)。造模一个月、三个月、半年后，脂联素基因及蛋白在健康组小鼠牙周组织中表达水平最强 , 在2 型糖尿病组 、2 型糖尿病伴牙周炎组小鼠牙周组织中表达水平依次减弱; 组间比较均有差异 ,存在统计学意义 (Plt;0.05)。结论：表明糖尿病后牙周组织脂联素表达降低是牙周炎发病及加重的重要因素之一，为临床治疗和预防牙周炎提供理论依据。 关键词：脂联素；昆明系小鼠；牙周炎；2 型糖尿病；牙周组织 【中图分类号】R94【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0021-01 大量流行病学研究证实牙周炎与肥胖有关系，纵向临床研究也表明牙周炎的发展与体重指数的增加有关，并且使糖尿病患者糖化血红蛋白的控制不佳[1-3]。在牙周炎，肥胖和T2DM之间，慢性炎症状态成为了其共同的病理机制之一。脂联素均与牙周炎和2型糖尿病有密切关系。我们采用建立糖尿病小鼠牙周炎动物模型的方法，研究脂联素的变化牙周炎对机体炎症状态的影响，以及这种影响是否与机体的胰岛素有关，从而揭示牙周炎与T2DM病变发生发展的关系，为临床治疗和预防提供理论依据。 实验方法： 1.1实验动物及主要药物和试剂 1.1.1实验动物 选用体重为20.1+0.86的8周龄雄性昆明系小鼠60只。标准颗粒饲料喂养，自然昼夜光线照明，室内相对湿度40%-70％，室温保持于20-25℃。实验期间动物自由饮水、进食。 1.1.2主要药物和试剂 Trizol；rTaqDNA聚合酶、dNTP Mixture；逆转录系统。苏木素-伊红CD3:一抗：兔抗小鼠CD3；二抗：山羊抗兔IgG SABC- FITC二抗检测试剂盒。10％水合氯醛TLR3:一抗：兔抗鼠TLR3单克隆抗体；二乙胺四乙酸二钠(EDTA)。 1.2实验方 1．2.1实验动物造模及分组 选用体重为20.1+0.86的8周龄雄性昆明系小鼠60只(。标准颗粒饲料喂养，自然昼夜光线照明，室内相对湿度40%-70％，室温保持于20-25℃。实验期间动物自由饮水、进食。按不同造模方式分为三组：对照组（20只），糖尿病组（20只），糖尿病+牙周炎组（20只）。四氧嘧啶（Alloxan）注射法建立小鼠糖尿病模型，具体步骤：四氧嘧啶以55 mgmiddot;kg-1times;3d 分次尾静脉注射造成小鼠糖尿病模型。分别于给药24h、72h和10天、20天、30天测定尾静脉血糖，以两次血糖值均大于16 mmol/L为标准诊断小鼠糖尿病，本实验40只小鼠两次血糖值均高于此诊断标准，糖尿病小鼠模型造模成功。牙周局部结扎联合涂菌建立小鼠牙周炎模型，具体步骤：腹腔注射10%水合氯（300-350mg/kg）醛麻醉, 取仰 卧位,小鼠四肢与头固定于手术架, 将小鼠舌牵出丝线捆绑固矩,以防止窒息。将3.0丝线分别结扎于左、右上颂第一磨牙及第二磨牙牙颈部并尽 量置于牙龈沟内，将浓度为109 CFU/ml的4种标准菌混合悬液接种于牙龈沟内, 每周检查丝线一次, 有脱落者及时重新结扎。建模时间为8周。 1.2.2 血清中脂联素的检测 分别在造模成功后一个月、三个月、半年，随机处死三个实验组小鼠（各5只）处死前经心脏取血。具体步骤如下：(1)称重，10%水合氯（300-350mg/kg）醛麻醉,诱导小鼠全麻；(2) 小鼠仰卧位固定，用手指触摸心脏搏动明显的位置，用拇指、食指、中指将心脏固定；(3)右手持注射器，平行于胸腔的方向进针，针头向前下穿刺，边进针边轻微回抽，有血液回抽到注射器时，保持针头的位置，采集足够的血液(约3m1)，放入无菌离心管中，每个离心管编号，与小鼠相对应。(4)收集的血液室温下静置30min，20000rpm离心10min，取上