转录后加工...ppt

第五节、转录后加工（内含子的剪接、编辑及化学修饰） 一.概述 二.真核生物转录后的加工 三.原核生物转录后的加工 四.内含子的剪接 五.编辑和修饰 六.RNA的转运及降解 一.概述 RNA加工的类型： 1、剪切：就是剪去部分序列； 2、剪接：是指剪切后又将某些片段连接起来。 3、末端添加核苷酸：如 tRNA的3′-末端添加-CCA。 4、修饰：在碱基及核糖分子进行化学修饰。 5、RNA编辑：某些RNA，特别是mRNA自DNA模板上所获得的遗传信息，在转录作用后又发生了变化。 转录后的加工（posttranscriptional modification） Cleavage: endo- and exonuclease cutting (rRNAs, tRNAs, and mRNAs) Polyadenylation: addition of poly A tail to 3? end of mRNA Capping: modification of 5? G in eukaryotic mRNA Splicing: cleavage at internal (intron) sites and ligation of exons to create mature mRNA Covalent modification: bases 转录后的加工 真核转录后的加工 ： mRNA tRNA rRNA 原核转录后的加工 ： tRNA rRNA 二.真核生物转录后的加工 mRNA tRNA rRNA （一）mRNA的加工 1.加帽 2.加尾 3.剪接：去掉内含子和连接外显子 4.修饰 5.编辑 1. 5’端加帽 帽子的三种类型： 帽子0（Cap-0） m7GpppX----------（共有） m7G N7—甲基鸟苷 帽子1 （Cap-1） m7GpppXm---------- 第一个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化 帽子2（Cap-2） m7GpppXmYm 第二个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化 帽子结构的功能： a. 翻译起始的必要结构，为IFⅢ（起始因子）和核糖体对mRNA的识别提供信号， b. 增加mRNA的稳定性，保护mRNA 免遭5’外切核酸酶的攻击。 c. 运输，有助于mRNA越过核膜，进入胞质； 三种帽结构 （1）mRNA5′末端pppNp在磷酸酶作用下脱Pi，形成ppNp-。 （2）在鸟苷酸转移酶作用下，与Gppp反应形成GpppNp-,连接方式为5‘-5’三磷酸桥。 （3）在甲基转移酶作用下，由腺苷蛋氨酸(SAM)提供甲基，在鸟嘌呤的N-7上甲基化 （4）在连接于鸟苷酸的第一个（或第二个）核苷酸2－OH上又进行甲基化，最后形成m7GpppNmp。 mRNA5’端帽结构形成过程 2、 3‘加尾 几乎所有真核基因的3‘末端转录终止位点上游15~30bp处的保守序列AAUAAA对于初级转录产物的准确切割及加poly(A)是必需的。 加poly（A）时需要由内切酶切开mRNA3‘端的特定部位，然后由poly(A)合成酶催化多聚腺苷酸的反应。 加polyA尾的过程： (1) 特殊组分(CPSF)识别AAUAAA并指导其它的活性 (2) 剪切因子(CF)在加尾位点 AAUAAA下游11－30nt 处剪切RNA 3’-端； (3) 末端腺苷转移酶（PAP）合成 poly(A)尾巴； (4) PBP与poly(A)结合，反应停止。 加Poly(A)的反应 第一步加一个短的寡聚A序列（10nt），此反应依赖于AAUAAA序列； 反应由poly（A）聚合酶在特殊因子指导下完成的。 第二步是寡聚A尾巴延伸到240nt的长度。 此反应并不需要AAUAAA序列，但需要一个识别寡聚A并指导poly（A）聚合酶延伸的刺激因子。 polyA尾巴的功能 与mRNA从细胞核转送到细胞质有关。 稳定mRNA结构，保持生物半衰期。 与真核mRNA的翻译效率有关： 缺失可抑制体外翻译的起始， 含 poly(A) 的mRNA 失去 poly(A) 可减弱其翻译。 （二）tRNA的加工 A.切除部分序列: 5′-端 一段前导序列 　 反密码子环 一段插入序列 B.3′-端CCA-OH的生成 tRNA核苷酸基转移酶 C