微载体培养Vero细胞工艺条件初探微载体培养Vero细胞工艺条件初探.pdf

维普资讯 第 港第 4期 擎 枣 也 工 学 院 学 报 VoI．15No．‘ I 9 8 g 年 Journal0fEastChinaInstituteofChemicalTechaology 1 口B口 微载体培养Vero细胞工艺条件初探 撩殿胜 董树沛 华 平 王 国政 俞俊棠 (生 化 工 程 研 究 所 ) 宋 家 骊 】彖! 列 胜 贺 适 民 (卫 生 部 上 海 生 物 制 品 研 究 所 ) 摄蔓：率文研鬼了绑童生长越翟中簟赣体艚种娄．教度爰鲴扈艚接种■，辟*囊 永早对培养 Vetol田胞的髯哺。在 pH 为7．O～7．4，矗*氧永早为 30 ～5o 空气悔 和漱度，搅拌遣度为25～35r／mln，量度为 37℃ 时．在 1．5升CelllgenTm熏堆中， 莲续墙养 7夭，可控钿扈靛度选刭2．5×10 ‘CelIs／mI．为搔种量的l2倍．缎蠢生长 旺盛．形鸯正常。 美薯谭：墼雅培养；格解氧；蠹藏休；Veto瓤赡 大规模哺乳动物细胞培养是现代生物技术的一个重要研究领域，贴壁依赖性细胞的大量 培养包括滚瓶、蝶片式、多层平板、 中空纤维、微胶囊固定化细胞、微载体培养等多种方 式 。自1967年VanWezel，A．L． 成 功 地 利用DEAE—sephadex A-50培养贴壁依赖性 动物细胞 以来， 已应用各种不同微载体成功地培养 了近百种绍胞 。 有工业应用价值的哺乳动物细胞大多为贴壁依赖性细胞，提供足够大的表面积是大规模 培养的必要条件 国内采用的滚瓶法 占地面积大，比表面积小，不易进行培养过程的检测与控 制。微载体培养系统，由于其此表面积大，．可以悬浮培养，能实现多种过程的捡测与控制， 正 日益受到国内外的重视，国外 已成功地应用微载体培养系统，生产诸如狂犬疫苗，脊髓灰质 袅疫苗等 。 大规模动物细胞培养过程 中，一些工艺参数对细胞生长、繁殖和 目的产物的获职都有影 响。本文就其 中的细胞培养之微裁体种类 、浓度及溶解氧等问题进行了研究 。 1 材料和方法 1．1 材料 1．1，1 细胞：Vero细胞 (非洲绿猴 肾细胞 )，由卫生部上海生物制品所提供 。 1．1．2 培养基：传代用培养基 ：EMEM，加小牛血清， 庆大霉素， 用 NaHCO,调节 pH至 7．0—7．4；1．5升反 应 器 系统培养基：EMEM，水解乳蛋白_}葭，小牛血请 ，庆大霉索，用 丰土 lgB}一10一l7收剿。 维普资讯 NaHCO3嘣 IpH 蔓 70～7．4 ． 1．13 磷酸缓冲敞(PBS)，pH7．O一7．2 】．I．4 撇戟体：Cytodex1(PharmaeiaFineChemicals)；化工 自制 I号微 栈体 ，类 Cytodex系 列 (华东化工学院生化工程研究所研究 )。 · 5反癣节{f_5升 H “胞培养系统(美固NBS公司 f|J】 1．2 方法 l·2．1 微载体 的预处理及灭菌：称取一定量的微载体置于硅化过的玻璃容器巾，按50M ／g )／hA磷酸缓冲液，pH7．O一7．2，充分洗涤，3小时后更换磷酸缓冲液，浸泡过液， 再次更换 冀酸缓冲液，然后于J2]℃灭菌3o分钟，使用前加八适最的培养基浸泡处理 12．2 细胞培养 ：将灭菌的微载体与一定数量的Vero细胞接触 (由铜胞接种遣听决定 )， 细胞咕壁时间为3小删，间隙盘拌，培养基体积为终体积的 [／／3左右。贴壁后将带细胞的微 载体转八 }．5升反应器内，外加新鲜培养基至终体积 (约 I．2升)，控铷细胞培养条件，pH为 7—0—7．4，溶解氧为．8o 一5o 空气饱和浓度 搅拌