cellquest和cellquest pro软件使用.doc

CellQuest和CellQuest Pro软件使用 CellQuest和CellQuest Pro软件是目前运用最为广泛的流式细胞仪采集及分析软件。它运行于苹果电脑上，优质的矢量图显示使得操作界面特别优美。现最新的微软公司的Vista软件也是仿苹果操作系统界面的，可想而知在使用CellQuest和CellQuest Pro时的强大功能及视觉质感。CellQuest和CellQuest Pro软件主安装在BD FACSCalibur型流式细胞仪上。 1．软件数据流程 在CellQuest和CellQuest Pro软件的数据流分为二个部分：方案和数据包。方案是指用户可以建立采集或分析所需的直方图或散点图、设门并定义门与门、门与图之间的逻辑关系。可以使用方案进行数据采集或分析以往已有的数据。每个采集方案分析样本后会生成数据包，该数据包中包括了样本中每个颗粒在各个检测参数上的数值，格式为FCS2.0或FCS3.0。 数据包必须由方案文件打开，无法单独显示，或者可由第三方软件进行分析，如WinMDI。 2.软件与仪器的连接 流式细胞仪需要加电开启后会向计算机发出信息，所以如要进行实验需要先开启流式细胞仪，然后再开启计算机。 先开仪器后开计算机，以确保仪器和计算机之间的正常通讯。 在苹果菜单下点击CellQuest和CellQuest Pro软件。 从Aquire菜单下选择connet to cytometer。 3．方案与数据之间的关系 CellQuest和CellQuest Pro软件的方案与数据相互独立保存，数据包可以由任一方案文件进行分析，分析后不改变数据包中的任何数据。CellQuest和CellQuest Pro软件中方案内的直方图或散点图有三种状态：Acquire，Analysis和Acquire-Analysis。 当图的属性为Acquire时，此图只限于采集下用，即只当进行检测时它才能显示颗粒； 当图的属性为Analysis时，此图只限于分析已保存的数据包，它不能用于采集数据。 当图的属性为Acquire-Analysis时，此图即可用于采集数据也可用于分析已有数据。 所以方便起见，我们一般将方案中的直方图或散点图全部设为Acquire-Analysis属性。 CellQuest Pro CellQuest 4．方案的建立 A选择实验参数 默认情况下，FACSCalibur流式细胞仪开机后只打开一根激光器，及五个参数供选择使用：FS、SS、FL1、FL2、FL3。当我们要使用第二根激光器及FL4通道时需要勾选FL4的选项，仪器自动打开633nm激光器。 B,建立散点图或直方图，命名坐标 CellQuest Pro软件主要工作界面，软件类似于Office word的工作面，可在A4大小的页面上进行编辑建立各种直方图或散点图。 在CellQuest软件下，需在选择Plot菜单，选择Format来打开图的属性对话框，其中包括了关于该图所有选项。 建立好直方图或散点图后，我们需要对所选的参数进行命名，如不修改软件自动命名为FS、SS、FL1、FL2、FL3和FL4。 在菜单上选择Acquire栏目，选择Parameter Description，可出现关于文件存储和参数命名的对话框。在这个对话框中用P字母来代表每个参数，并在此对每个采集参数进行命名，FL1为CD3FITC，FL2为CD4PE……。 C,设门并建立门与图之间的关系 R与G的关系 R是Region的首个字母，Region一般是指一个闭合形的区域，如矩形区、自由区和圆形区。区域与区域之间可以进行逻辑运算，如AND、OR、NOT等关系。当区域进行运算时软件引进了算术公式的管理概念： Gate实际了个代数式，简称G，其运算式默认如下： G1 = R1，或G2=R2 当我们要进行逻辑运算时，可变更为G1=R1 AND R2。此时G1就成了一个算术结果了。 G1=R1 AND R2 G2=R1 NOT R2 G3=R1 OR R2 Region List管理门，可以重命名或删除门。Gate List是对门进行逻辑运算和标识颜色的工具。 建立门与图之间的关系 打开要编辑的直方图或散点图的属性对话框，选择Gate选项，选择门即可。 D，显示统计参数 5．仪器的操作 当计算机与流式细胞仪联机后便会出现以下采集控制框： 在有关仪器操作所有控制选项框都在Cytometer下拉菜单下，同时按住“苹果”键及1、2、3、4便可调取所有控制框： 6．文件的保存及调用 实验或分析过程中所建的方案可以保存下来，通File下拉菜单可以保存这些方案文件： 如要打开这些分析方案只需双建方案图标