5‘ 3′-Full RACE试剂盒说明.docVIP

3′-Full RACE Core Set Ver.2.0 TaKaRa Code 包装量 价格 说明书 购物车 D314 20 次 1,800 元 ? ? ■ 制品内容 (20 次量) 制品内容1～9项为用于3′RACE实验的反转录用试剂，可用于20次反转录反应 (约100次3′RACE PCR反应)；10～12为Control实验用试剂，可进行5次Control实验。 Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) (200 U/μl) 10 μl RNase Inhibitor(40 U/μl) 10 μl 5 × M-MLV Buffer 40 μl dNTP Mixture (10 mM each) 20 μl 3′RACE Adaptor (5 μM) 20 μl RNase Free dH2O 1 ml 1 × cDNA Dilution Buffer II 1 ml 3′RACE Outer Primer (10 μM ) 200 μl 3′RACE Inner Primer (10 μM ) 200 μl Control HL60 Total RNA (500 ng/μl)* 10 μl 3′RACE Control Outer Primer (10 μM)* 10 μl 3′RACE Control Inner Primer (10 μM)* 10 μl ? ? * 用于扩增Human Prohibitin (PHB) 基因。 ? ■ 制品说明 本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3′末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDNA片段，然而在基因工程研究中，分析遗传基因的全长cDNA序列又是十分重要的。RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 法能有效地解决这一问题。TaKaRa 3′-Full RACE Core Set Ver.2.0能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3′末端的全长序列。 本试剂盒中含有完成3′-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。结合使用TaKaRa LA Taq (TaKaRa Code：DRR02AM) 进行PCR扩增时，其3′RACE的扩增性能大大优于其他同类产品。本试剂盒应用了套式PCR原理，增加了PCR扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行3′RACE实验，并且对长片段的3′RACE扩增具有明显优势，我们曾经使用本试剂盒成功扩增了8 kbp的3′RACE DNA片段。使用TaKaRa LA Taq 扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A” 碱基，其产物可直接克隆于T-Vector中。反转录引物3′RACE Adaptor Primer含有由TaKaRa独特设计的dT区域，反转录效率高。3′RACE Inner Primer中含有BamH I 酶切位点，为克隆实验提供了方便。制品中的Control RNA及Control Primer可以用于Control实验。 ? ■ 各种引物的序列 引物名称 各引物序列 (5′→3′) ???????3′RACE Adaptor ???????含有由TaKaRa独特设计的dT区域及Adaptor Primer部分 ???????3′RACE Outer Primer ???????TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT ???????3′RACE Inner Primer ???????CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG ???????3′RACE Control Outer Primer ???????GAGTGCAGGACATTGTGGTAGGG ???????3′RACE Control Inner Primer ???????ATCTTTGACTGCCGTTCTCGACC ? ? ■ 试剂盒原理 进行3′RACE 实验时，首先由Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 将Poly(A)+ RNA反转录成cDNA，然后再使用TaKaRa LA Taq (TaKaRa Code: DRR02AM)，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应。3′RACE Adaptor Primer作为反转录引物用于cDNA合成 (具体原理见图1)。 ?