8细菌感染检查方法防治原则.pptVIP

* 主讲人： 《中 华 医 学 检 验 全 书》 主 编 北华大学临床微生物学 教 授 海 南 医 学 院 特 聘 教 授 李影林 2009年10月 一、掌握 病原菌的常规分离与鉴定方法原则和常用的检测细菌抗原的方法。 人工自动免疫和人工被动免疫的概念。 常用生物制品的概念和特点。 细菌标本的采集与送检的主要原则。 二、熟悉 抗菌药物的主要作用机制。 三、了解 临床感染性疾病用药的基本原则及检测细菌对药物敏感性的 常用方法。 目的要求 第一节 细菌感染的诊断 病原菌感染的诊断 细菌学诊断 检测病原菌及其Ag 产物或核酸 血清学诊断 检测血清中的特异性 抗体 原则：采取急性期和恢复期双份血清，后者的抗体效价比前者升高≥4倍者有意义。 一、病原菌检测 1.标本的采集 ⑴疾病种类不同采集不同的标本 ⑵注意无菌操作,严防标本污染 ⑶抗菌药物应用之前 ⑷尽快送检,特殊要求标本要特殊处理 ⑸标本作好标记,认真填写化验单 (6)正确的包装、运输和保存 采集合适的标本 严格无菌操作 正确采集标本 正确标记及包装 正确运输及保存 2.致病菌的检验程序 直接涂片镜检 生化试验 血清学鉴定 药物敏感试验 PCR诊断技术 分离培养 动物试验 标 本 直接检查 涂片 Gram 染色 初报 Ag检测 分离培养 直接药敏试验 初 报 观察挑选可疑菌落 药敏试验 报告 纯培养 生化反应 培养特性 血清学鉴定 报告 动物实验 分子生物学检查 报告 致病菌的检验程序 (1)细菌形态结构检查 ①显微镜放大法 普通光学显微镜 电子显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 同焦点显微镜 3.检验方法 ②染色法 单染色法、革兰染色法 抗酸染色法 、 特殊 结 构 染色法、异染颗粒染色法 、细胞壁染色法 直接涂片染色镜检 单 染 法——只显示细菌的形态与排列 复 染 法——可观察细菌的形态、排列及其染色性 革兰染色（Gram’ stain) 抗酸染色（Acid-fast stain) 特殊染色法——荚膜染色、芽胞染色、 鞭毛染色、异染颗粒 染色法 脑膜炎奈瑟菌（革兰染色） 结核分枝杆菌（抗酸染色） 分离培养与鉴定 液体培养基：增菌培养 半固体培养基：查动力或保存菌种 固体培养基：平板用于分离培养 斜面用于纯培养或保存菌种 生化试验（biological tests） 糖类代谢 糖发酵试验 VP试验（Vi） 甲基红试验（M） 枸橼酸盐利用试验（C） 蛋白质代谢 靛基质（吲哚）试验（I） 硫化氢试验 尿素分解试验 血清学鉴定（serological tests） 已知抗体（抗血清） 待检抗原（未知菌） 直接法——玻片凝集试验（定性试验） 动物试验 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等 药物敏感试验 纸片琼脂法 测量抑菌环直径 （1）沉淀反应（precipitation） 可溶性抗原（细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。 病原菌的抗原检测 （2）协同凝集：用SPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。 （3）免疫荧光法：志贺菌荧光Ab→培养基+粪便标本 荧光球。 （4）酶免疫测定：ELISA测淋球菌、肠道菌抗原检测。 （5）PCR测细菌核酸 标本：双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义 种类： 凝集试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 沉淀试验：梅毒VDRL、RPR试验等 中和试验：抗“O”试验等 补体结合试验：Q热柯克斯体抗体检测等 血清学诊断（双份血清） 原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 补体结合试验：诊断Q热； 中和试验：诊断链球菌后风湿热的抗O试验 链球菌溶血素O+SRBC→溶