人宫颈癌细胞凋亡的线粒体膜电位及细胞周期的研讨.pdfVIP

人宫颈癌细胞凋亡的线粒体膜电位及细胞周期的研究 关燕清屈晓丹 华南师范大学生命科学掌院，广东广州，510631 摘要 目的：探讨干扰素一7和肿瘤坏死因子一a协同谤枣人官颈癌细胞(HeLa)凋亡 的作用．方法l利用先化学固定方法，将不同难度IFN—T和TNF一口共同辆联到高分子材料 聚孳乙烯基板上，合成先活性材料，并婶梧应浓度的游离细胞因子作平行对服实验．使用流式 细胞术检测不同处理方式的细胞霹予．在3天作用时闯里，对人宫颈癌细胞残粒律膜电位厦细 胞周期的影响．结论l共霹定细胞因子能使Heh细胞残粒体膜电位下降I从细胞周期上看， 磷离细胞因子主要诱导HeLa细胞在S期凋亡．而菇固定细胞因子的谤导凋亡作用删可能属 于细胞周期非特异性谤导机捌．提示共田定细胞因子可能为肿瘤治疗开制新的领域． 关键词先固定化细胞凋亡践粒锥膜电位细胞用期 随着纲胞凋亡及其与瘸症治疗的相关性已逐渐成为科学家们的研究热点，宫颈癌细胞凋亡的研究 表明，利用生物医用高分子作载俸，化学结会或物理包理抗癌药物，可使药物缓慢作用并增强杀伤肿瘤 细胞的活性．渤 步研究，为今后研制细胞因子靶向高分子药物奠定基础． 一、材料与方法 (一)树料与设备 1．材料与试剂 限公司}RPMlmedium pidi岫iodide，P1)和RNA酶虞中山大学附属第一医院检验室提供． 2．仪器 Sigma (二)方法 1．光活性琢N一7与TNF—n的制备 ·118· 合成结束后，分疑使用超过滤离心管离心，以纯化蒸氮苯基衍生物，冷冻干燥备用．使用前。加入PBS (一)溶液溶解，并调整至所需浓度． 2．人子宫磺癌雏胞(HtL直}的培养 使用RPMl 7．2～7．4)，在37℃．5％C吼培弊箱中对HeL矗细胞进行常规继代培莽． 取处于对效生袈期的细胞，用O．25％胰蛋白酶消化，洗涤，调整浓度为l×104 悬液． 3．细胞因子药物对HeL-细胞凋亡的诱导实验 TNF—a分别以相应浓度加到PSt上．每孑L都加入1mL含1×106 OD2培彝箱中分别培养72h和144h． 4-流式细胞仪检测线粒体膜电慌和细胞周期 ‘ 后，上机检测． 二、结果与分析 (一)流式细胞仪对细胞线耘体膜电位变化的分析 1．细胞因子药物诱导3天对线粒体膜奄位变他的影响 细胞因子作用后，HeLa细胞的线粒体膜电位均有下降，裹浓度的维胞因子对线粒体膜电位的影响比低 浓度的要大，但游离纲胞因子组之闻的效果差秀离于共固定细狍因子缎．表1是平均荧光强度对照表． 子的作用效果鳃显大于游离细胞因予． 裹l 3茭平均贽光强度对黑衰 z舶ng，mL共固定 AI空白灌12∞姆／皿L辩囊·CI∞0n∥mL共嗣定lDl20耐删L翦^·E ·119· l-2 I O．8 n．6 0．4 }}-毒，葛l毒 置馁￡；№l￡t§墨 012 O ● 2 3 图1游离细胞因子药物诱导3天线牧体膜电位壁化 1．空白慰蕉·冬∞0吲毗13．20ng，mL 1： 善0‘8 弘