中国广东地区人群血清转铁蛋白遗传多态现象及其法医学应用初步探讨.doc

中国广东地区人群血清转铁蛋白遗传多态现象及其法医学应用初步探讨 《法匿学杂志》5I2.1989 中国广东地区人群血清转铁蛋白遗传 多态现象及其法医学应用初步探讨 中山量辩太拳击E幕物证教研担 郭大玮郭景元 人血清转铁蛋白是存于人血浆中具有遗 传多态性的蛋向质由肝脏台成{血谤吉量 为2OO~30Omg/1OOml.转铁蛋白有运输铁 及抗感染等功能,分子量为79570遭尔顿, 一 级结构含679个氨基酸残基,等电点5.5, 含糖量6,基因定位于8q”一q”. 转铁蛋白首先由Smithies0957)报 导--.用淀粉凝驳及聚丙烯酰胺凝胶电泳 可分为TfB,TtC,TfD三种主要变异型, 其中TfB,TfD又可细分为2O余种变异型 1978年,knbnl和Spielmann:0冉Thy- mann【]分别用等电聚焦电泳方法将TfC 又分为三个普通亚型TfCC,TfCC,与 TfCC¨此后TfC亚型分型时有报导.日 前,至少有l4种Tfc亚型已被摄导.家系 调查襄明:转铁蛋内的遗传变异型都是出一 个基因位点的共显性等位基因所控糊.群体 调查结果揭示::.世界各地人群中Tf,’, Tfct基因频率及其表型杂合度较高,对于 法孥亲扳鉴定砭个人识别有一定意义 国外学者已对TfC亚型系统在父权鉴 定,个人识别方面的应用进行了.探讨,并用 于亲予鉴定案例中,周内尚未见到TfC亚型 分型的报导本文旨在对转铁蛋i自袭现型 在广东地区人群分布特点及其法医学亲投鉴 定个人识别的应用价值进行探讨,对血痕 中转铁蛋白的检测进行初步研究I并摸索国 产化分离试剂用于检测这一多态系统的电泳 条件. 材料与方法 衄清来源:不含抗凝剂的新鲜血清米色 本院保健科提f=}}的广东地区258名无关健康 人. 血痕制备:由附一院得来的全血滴于新 华滤纸上晾干,分别置于4,室温,37 条件下保存. 血清处理:1l血清加5”I神经氨酸 酶lt;Sma公司,typeV,10/m1)置于 37水浴箱24小时或5’Llm请加20”l 0.25%硫酸亚铁铵4过夜. 血童处理:取已知血清Tf型剁的血痕, 剪取约3×4mm大小,加一滴(约2O1) O.5硫酸亚铁铵置于37水浴箱3O 凝驳板的制各}取两块12×18cm的玻 璃扳,一侧表面贴上聚酯膜,将内径为10x16 cm太小的橡皮囤置于两块玻璃板中周,并 将两支6/针头置于皮圃与聚酯膜之间, 形成玻璃～聚酯膜一皮圈～累酯膜～玻璃的 夹层,四周用铁史夹紧. 将下列试剂依次加入5Oral抽滤瓶中 一 1一 (总体积12ml,T5,C8,两性电解 质载件浓度2.2%). 丙烯酰喷(29.1%,W/V,2ml N,N一豫甲基硬丙烯酰睦(0.9%, W/V)2ml 双蒸水7.1mI 蔗糖1.56g 两性电解质载体(40,pH5—7, 北京军事医学科学院批号870503)0.66ml 壳分泥匀,抽气(负压600mmHg5 分) 过硫酸铵(1,W/V) TEMED 0.24mI 12ul 充分混匀后,用20m1注射器沿针孔注 入臻具中,置于4O～50烤箱内,三小时 后来合完全,移入冰箱待用. 电泳;胶约1x95~160ram大小电 扳阔P臣9.5cm,正拯电极液:0.05M HsPO,负极电设渡l0.2MNaOH.将 处理液浸匿8×4mm大小的滤纸上,用神 经氨酸黪处理的样品置于距负极2c[ri的胶 面上,用硫酸亚铁铵处理之样品点样于距负 极2cm的瞪面上.加好电设即可电泳,最 大电压1200V,最大电流不超过30mA,最 大功率不超过20W;总共电浓3760伏特?小 时(Vh),约8小时左右.电泳过程均于 4条件下进行. 固定,染色,脱色:各组试荆组成如 下l 固定液t三氯醋酸49g 磺基水扬酸68.3g 甲醇300ml 加水至1000ml 染色液:考马斯亮蓝R250lg 乙醇175ml 冰醋酸50ml 加水至500ml 脱色液:甲酵475ml 冰醋酸50ml 加水至1000ml 将电浓后的凝胶板放入固定液中固定3O 分,自来水中浸片刻,再置于37恒温箱中 8小时,待半千后置于50染色液中染色l0 =分,经适当脱色后便可观察结果. 免疫固定:[] 将抗转铁蛋白血清(上海,卫生部生物 制品研究所生产,单扩散赦价1t100,批 号8701)直接滴于胶面相当于转铁蛋白带的 位置,移入37水浴箱内水平放置约1小 时,移出后在黑色背景下即可观察到相应位 置有白色沉淀带形成.再用浸有生理盐水的 五层滤纸(不必太温)复盖于胶面上,上压 约0.5kg的蘑物,室温静置半小时;反复一 ～二次,以吸去未与转铁蛋白结合的多余抗 体.再将凝胶置于1000m1生理盐水中浸泡 过夜.次日,经染色,脱色便可观察结果. 结果观察:血清TfCCTfCC:纯 合子为单一谱带,TfC带在T