HPLC法检测雷公藤悬浮细胞中雷酚内酯的含量研究.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC法检测雷公藤悬浮细胞中雷酚内酯的含量研究 叶龙飞1,2 张景红1,2 　　（1华侨大学生物医学学院 福建泉州 362021） 　　（2 华侨大学分子药物教育部工程研究中心 福建泉州 362021） 　　【摘要】 采用梯度洗脱的方法，建立了雷公藤悬浮细胞体系中雷酚内酯的定量检测方法，并考察了MeJA对雷公藤悬浮细胞体系中雷酚内酯含量的作用。 　　【关键词】雷公藤 悬浮细胞 雷酚内酯 高效液相色谱 　　【中图分类号】R44 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）10-0141-02 　　高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography /HPLC）是一种具有高效、低廉，操作简便等优点的一种检测方法， 广泛运用于天然药物的提取、分离和测定研究[1-3]。我们课题组成功从雷公藤悬浮细胞中分离得到雷酚内酯，但是以前的研究中，由于雷酚内???在雷公藤中含量极少，目前的研究尚未建立稳定的HPLC检测方法，加之雷公藤悬浮细胞体系分离比较复杂。缺乏雷酚内酯的定量分析方法。为此，本文从雷公藤悬浮细胞体系中分离得到雷酚内酯，建立了雷酚内酯HPLC检测方法。得到了满意的检测效果。现报道如下： 　　1 实验材料和方法 　　1.1 药品和试剂 　　雷酚内酯对照品（纯度gt;98%，由本实验室自主制备获得） 　　1.2 仪器与方法 　　1.2.1 仪器 　　高效液相色谱仪 Agilent 1200型，美国Agilent公司 　　色谱柱：Hypersil ODS2-C18柱(4.6mmtimes;250mm,5mu;m) 　　1.2.2 色谱分离方法 　　表1 雷酚内酯HPLC梯度条件 　　 　　 　　图3雷酚内酯标准品的标准曲线 　　以峰面积平均值（Y）为纵坐标，以浓度（X）为横坐标进行线性回归（见图3），得回归方程y = 118.83x +174.18 R2 = 0.9988。表明雷酚新内酯标准品溶液在1.5-96mu;g/mL的范围内具有良好的线性关系。最低检测限为0.13mu;g/mL。 　　2.3 日内精密度 　　以6.0、24.0、96.0mu;g/mL雷公藤甲素标准品溶液为测定需要的低、中、高三个浓度溶液，于ld内每隔4小时重复测定5次，并计算RSD值和RE值，结果见表3所示。 　　表3 日内精密度考察 　　标准品浓度（mu;g/mL） 日内精密度（n=5） 　　 测得浓度（平均值-xplusmn;SD，mu;g/mL） 精密度 　　（RSD%） 准确性（RE%） 　　6.0 5.78plusmn;1.46 0.19 6.9 　　24.0 24.00plusmn;1.44 0.16 2.4 　　96.0 93.00plusmn;1.20 0.37 1.9 　　由表3可以得出6.0、24.0、96.0mu;g/mL三个浓度的雷公藤甲素标准品溶液在1d内的RSD值分别为0.19%、0.16%和0.37%，RE值分别为6.9%、2.4%和1.9%，表明日内精密度良好。 　　2.4 日间精密度 　　以6.0、24.0、96.0mu;g/mL雷公藤甲素标准品溶液为测定需要的低、中、高三个浓度溶液，分别于制备后0、1、3、5、7 d测定其峰面积，并计算RSD值RE值，结果见表4所示。 　　表4 日间精密度考察 　　标准品浓度（mu;g/mL） 日间精密度（n=5） 　　测得浓度（平均值-xplusmn;SD，mu;g/mL） 精密度（RSD%） 准确性 　　（RE%） 　　6.0 5.78plusmn;1.46 0.13 7.0 　　24.0 24.02plusmn;1.44 0.25 2.4 　　96.0 93.85plusmn;1.42 0.07 1.0 　　由表4可以得出6.0、24.0、96.0mu;g/mL三个浓度的雷公藤甲素标准品溶液在7d内的RSD值分别为0.13%、0.25%和0.07%，RE值分别为7.0 %、2.4%和1.0%，表明日间精密度良好。 　　2.5 稳定性 　　以6.0、24.0、96.0mu;g/mL雷公藤甲素标准品溶液为测定需要的低、中、高三个浓度溶液，分别于25℃下放置24h和4℃下放置28 d后测定其峰面积，并计算RSD值和RE值，结果见表5和表6和所示。 　　表5 25℃稳定性考察 　　标准品浓度（mu;g/mL） 日内精密度（n=3） 　　测得浓度（平均值-xplusmn;SD，mu;g/mL） 精密度（RSD%） 准确性 　　（RE%） 　　6.0 5.81plusmn;1.46 0.