尼古丁对兔骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性影响的实验研讨.pdfVIP

尼古丁对兔骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶 活性影响的实验研究 李 强 龚维成 秦宏敏 中文摘要 目的:研究尼古丁对骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性的影响，从而探讨吸烟对 骨骼发育及骨折愈合和骨坏死修复的可能影响。 方法:选用一月龄新西兰兔，自胫骨上端抽取骨髓血2ml，用 70%Percoll (1.073g/ml),2000r/min，离心20min后，吸取单核细胞层，接种于培养瓶中， 瓶中预置p(=10%FBS的DMEM培养液6ml，转入孵箱，370C,50mULCOZ培养。 48h后首次进行全量换液，以后每2-3d换液一次，待细胞长至80%融合时，0.25 %胰酶 (含。.02%EDTA)消化，传代扩增。取对数生长期的第4代骨髓间充质 干细胞，胰酶消化后，用cp=10%FBS的DMEM充分吹打，使之成为单细胞悬液， 计数，调整细胞浓度为2x1护个//ml,接种于4块%孔培养板中，每孔接种细胞 悬液1001xl,cp=10%FBS的DMEM标准环境下培养。待细胞铺满孔底后，随机抽 取一块%孔培养板，弃原孔内培养液，无血清DMEM洗3遍，每板分5个实 验组和1个对照组，每组12孔，实验组依