泸型大曲中根霉固态发酵产糖化酶条件研究.pdfVIP

第25卷第3期 四川理工学院学报 (自然科学版) Vo1．25 N。．3 2012年 6月 JournalofSiehuanUniversityofScienceEngineering(NaturalScienceEdition) Jun．2012 文章编号：1673—1549(2012)03-0009-05 DOI：10．3969／j．issn．1673—1549．2012．03．003 泸型大 曲中根霉固态发酵产糖化酶条件研究 黄 丹，尚志超，袁先铃，李玉龙 (四川理工学院生物工程学院，四川 自贡 643000) 摘 要：对泸型大曲中根霉菌株固态发酵产糖化酶的条件进行 了研究。以糖化酶活力为评价指标， 设计单因素实验，研究培养基水分含量、培养时间、培养温度对根霉产糖化酶的影响，在此基础上，利用 Box—BenhnkenDesign的方法，对根霉菌株固态发酵产糖化酶的条件进行优化，结果显示泸型大 曲中根 霉菌株固态发酵产糖化酶的优化条件为培养温度29℃，培养基水分含量53％，培养时间164h，糖化酶 的酶活力为2194．44U／g。 关键词：根霉；糖化酶；固态发酵；产酶条件多相流 中图分类号：Q814 文献标识码：A 葡萄糖淀粉酶 (Glucoamylase，EC．3．2．1．3)又可称 1 材料与方法 为 一淀粉酶 ( 一amylase)或淀粉葡萄糖苷酶 (Amylo— glucosidase)，因在发酵工业中大量用作淀粉糖化剂，通 1．1 材料 常又被简称为糖化酶。糖化酶底物专一性较低 ，不但可 1．1．1 菌株 以从淀粉的非还原末端依次水解 一1，4糖苷键，切下 实验采用的根霉菌株为Rh一4，分离 自泸型大曲。 一 个个葡萄糖分子，而且可以水解支链淀粉中的 —l，6 1．1．2 培养基 糖苷键，甚至对 仪一1，3糖苷键连接的碳链也有微弱的 斜面培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂 15～ 水解作用。糖化酶能将淀粉百分之百的水解为葡萄糖 ， 20g，水 1000mL，pH 自然，121℃灭菌20min。 并像 B一淀粉酶一样，使水解下来的葡萄糖发生构型变 固体发酵培养基：破碎小麦处理后的小麦30g，蒸 化，形成 B—D一葡萄糖 ，因此被广泛地应用于酒精、白 馏水 36．6mL，115oC灭菌30rain。 酒、抗生素、氨基酸、有机酸、甘油、淀粉糖等工业中，是 1．2 方法 我国产量最大的酶制剂产品…。 1．2．1 孢子悬液制备 在 白酒酿造过程 中，淀粉质原料正是通过糖化酶 将孢子接种于斜面培养基中培养 3d，用接种环将 的作用水解为葡萄糖后被酵母菌利用产生酒精 ，而 孢子移到无菌生理盐水中，摇匀用脱脂棉滤去菌丝，计 根霉是浓香型大 曲中糖化酶 的主要产生菌 ，因此 数，然后将孢子悬液稀释至孢子数为 1O个 ／mL。 大曲中根霉糖化酶活力的高低直接决定了大曲糖化 1．2．2 糖化酶粗酶液制备 力的高低 ，对 白酒生产中出酒率有重要 的影 响。所 将长满菌丝的培养基从锥形瓶中取出，捣碎后搅拌 以，研究固态发酵条件下根霉糖化酶 的产酶条件 ，能 均匀，测定鲜曲的含水量。取相当于5g绝干曲的鲜曲 够对大曲的生产提供理论指导和数据支持 ，为解决 置于250mL锥形瓶中，加入 20mLpH4．6乙酸 一乙酸 大曲生产 中所遇到的用曲量大 、糖化力不高等实 际 钠缓冲液，补加蒸馏水至 100g，摇匀，然后在 40℃下水 问题提供思路 。 浴抽提2h，每 15rain震荡一次。滤纸过