不同病理类肾病综合征患者尿蛋白对HK-2细胞凋亡及肾间质纤维化的影响.docVIP

精品论文 参考文献 不同病理类肾病综合征患者尿蛋白对HK-2细胞凋亡及肾间质纤维化的影响 梁灼源1 杜艺2 冯明亮1 胡国强1 ( 1 江门市中心医院肾内科 5 2 9 0 0 0 ) ( 2 中山大学附属第五医院血液净化中心 519000) 【摘要】目的 通过分析不同病理类型尿蛋白对肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells, RTECs）凋亡及肾间质纤维化的影响，探讨不同病理类型的肾小球疾病与小管- 间质的病变程度差异之间的关系，以进一步明确蛋白尿致肾小管- 间质损害的机制。方法 用硫酸铵沉淀法提取三种不同病理类型为微小病变（ minimal change disease）、膜性肾病（membranous nephropathy）、局灶节段性肾小球硬化症（focal segmental glomerular sclerosis）并排除继发性因素的肾病综合征患者尿液中的总蛋白成分，以不同浓度尿蛋白刺激HK-2 细胞，四甲基偶氮哇盐（MTT）比色法检测不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白刺激HK-2 细胞后的细胞凋亡率； Western blotting 法检测HK-2 细胞 Col-I 的表达。结果 1. 同一病理类型肾病综合征患者尿蛋白诱导HK-2 细胞凋亡的作用随尿蛋白刺激浓度的增加而增强，各浓度组间比较有显著性差异（P ＜ 0.05）。同一浓度不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白诱导HK-2 细胞凋亡的作用不同，其中FSGS 患者的尿蛋白作用最显著， MN 其次，MCD 最弱，各类型组间有显著性差异（P ＜ 0.05）。当尿蛋白浓度＜ 2.0mg/ml 时，不同病理类型之间差异无显著性（P ＞ 0.05）。2. 同一病理类型肾病综合征患者尿蛋白诱导的HK-2 细胞表达Col-I 的水平随蛋白刺激浓度的增加而增加，各浓度组间比较，有显著性差异（P ＜ 0.05）。同一刺激浓度下，FSGS 患者尿蛋白诱导HK-2 细胞表达Col-I 水平最高，MN 其次，MCD 最低，且当尿蛋白浓度ge; 4.0mg/ml 时，不同病理类型之间比较，有显著性差异（P ＜ 0.05），当尿蛋白浓度＜ 4.0mg/ml 时，不同病理类型之间差异无显著性（P ＞ 0.05）。结论 1. 在体外条件下，尿蛋白呈剂量依赖性的对HK-2 细胞有诱导凋亡作用，其中FSGS 患者的尿蛋白作用最显著，MN 其次，MCD 最弱。2. 在体外条件下，尿蛋白呈剂量依赖性的对HK-2 细胞诱导Col-I 蛋白表达增加，其中FSGS 患者的尿蛋白作用最显著，MN 其次，MCD 最弱，说明除尿蛋白的量是肾间质纤维化重要影响因素外，尿蛋白的组成也在引起肾小管间质纤维化的机制中起重要作用。 【关键词】尿蛋白 肾小管上皮细胞 凋亡 肾小管间质纤维化 I型胶原 【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）07-0097-03 肾间质纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期肾病的一个共同途径[1]。蛋白尿是在引起肾小管上皮细胞损伤的众多因素中极为重要的因素之一。有研究认为，蛋白尿的量和持续时间，与肾小管间质病变程度、肾功能衰竭的进展速度密切相关，是大多数肾小球疾病预后不良的独立危险因素之一。但迄今为止，蛋白尿在肾小管间质纤维化过程中的机制尚未完全明确。以往绝大多数体外试验用牛血清或纯化的人血清白蛋白代替尿蛋白进行研究。而实际尿蛋白的组成很复杂，用单一的蛋白成分并不能完全代表体内蛋白尿中多种成分的共同效应。因此我们提取原发性微小病变（MCD）、膜性肾病（MN）、局灶节段硬化型（FSGS）肾病综合征患者的尿蛋白，刺激体外培养的肾小管上皮细胞，观察不同浓度、不同性质的尿蛋白对肾小管上皮细胞凋亡及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的产生的影响。有利于我们更直接找到蛋白尿对肾小管不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白对HK-2 细胞凋亡及间质损伤的影响的原因，从而为早期防治肾间质纤维化提供理论依据。 材料与方法 1材料 HK-2细胞株为人近曲肾小管上皮细胞株，购于美国ATCC细胞库。DMEM/F12，胰岛素，Gibco,U.S.A；胎牛血清，转铁蛋白，TrizolReagent，Invitrogen，USA；胰蛋白酶，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2），BSA，Aprotinin，L-glutamine，DMSO（二甲基亚砜），丙稀酰胺，甘氨酸，过硫酸铵，甲叉双丙稀酰胺，MTT，Sigma,U.S.A；GAPDH(FL-335)，Goatanti-rabbitIgG-HRP，Goatanti-mouseIgG-HRP，PMSF（苯甲基磺酰氟），San