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第十九章 补体检测 master：溶血反应、CH50 试验的原理； be familiar：溶血反应、补体结合实验结果判断 ；单个补体成分的检测方法Know:补体性质和活化途径 三、补体的激活 一、免疫溶血法 反应分两阶段进行： 第一阶段 先加入检测系统及补体，让其有优先结合的机会 第二阶段 加入致敏绵羊红细胞，检测补体的存在与否 参考资料 《临床免疫学与检验》第四版，王兰兰、吴健民主编，人民卫生出版社，2007.7 /index.html /download * * * 新乡医学院 临床免疫学与检验教研室 目的要求 第一节 概述 补体性质不稳定，易失活，因此做补体 检测必须用新鲜血清 1、固有成分：C1—C9 2、调节蛋白：I因子、H因子、C1INH 3、补体受体：C1qR、C3aR 一、补体的性质 二、补体的组成 活化阶段 效应阶段 识别阶段 四、补体的生物学作用 功能检测 1、总补体活性的检测 2、单一补体活性的检测 量的检测 单一补体量的测定 功能检测多采用溶血实验 量的检测采用免疫浊度法或单扩法 补体检测 SRBC SRBC SRBC SRBC SRBC 第二节 补体总活性测定 绵羊红细胞与相应的抗体结合后形成致敏羊红细胞，在补体存在的情况下，启动经典激活途径，导致致敏羊红细胞的细胞膜穿孔，释放血红蛋白，从而发生溶血 一、溶血实验原理 CH50曲线 原理：在50%溶血附近，S型曲线最陡，当补体量稍有变动，即可对溶血程度发生很大的影响。故以50%溶血作为终点，较以100%作为溶血终点更敏感。 二、CH50测定方法 1.绵羊红细胞浓度的调整（2％－5％） 2. 溶血素滴定（抗绵羊红细胞抗体，灭活补体） 3. 稀释缓冲液 4. 50%溶血标准管 5. 50%溶血总补体值的计算 CH50(U/ml)=(1/血清用量)*稀释倍数 三、方法评价与临床意义 方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除 与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、绵 羊红细胞的数量以及反应温度有关。检测的是补体 经典途径的溶血活性，所得结果反应补体C1－C9等 9种成分的综合水平。 水平下降：严重肝病、营养不良、G 细菌感染 水平升高：心肌梗塞、妊娠、糖尿病、甲状腺炎 第三节 单个补体成分的测定 常作为单个补体成分检测的指标： C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等 测定方法 免疫溶血法 免疫化学法 自动化免疫散射比浊法 定义：根据补体参与抗体介导溶细胞作用的 级联效应特征建立的单一补体成分检测法 指示系统：绵羊红细胞和康绵羊红细胞的抗体 参照体系：缺乏某种补体成分的血清为参照 结果判断 一、免疫溶血法 方法评价：绵羊红细胞作为抗原参与的溶血反应不能反映参与旁路和MBL途径识别、活化阶段的补体成分是否存在。快速、简便，敏感性低，且不能定量 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分检测更为常见。 二、免疫化学法 1.单向免疫扩散 2.火箭免疫电泳 3.透射比浊法 4.散射比浊法 前两种方法:手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、结果重复性差，已趋于淘汰 后两种方法：通过仪器对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行自动化测定 第四节 补体结合试验 (complement fixation test，CFT ) 一、原理 反应不发生溶血，待测 物存在，试验结果阳性 反应发生溶血，证明待测 物不存在，试验结果阴性 二、试验方法 补体结合实验中各成分用量之间必须有适当 的比例，才可以避免假阳性或假阴性结果。因此，除绵羊红细胞浓度固定在2%-5%，溶血素用量2单位外，其他成分均需事先滴定其单位，配制成特定的浓度，以保证结果的可靠性 正式试验 实验过程 稀释和处理后的标本与已知抗原或抗体、不同含量的补体温育，最后与指示系统共育 结果判断 首先观察对照管 阴性对照管:溶血 阳性对照管:不溶血 抗体或抗原对照管:完全溶血 待检血清对照管（不加入血清）:完全溶血 绵羊红细胞对照管:不出现自发性溶血 三、方法评价 优点： 1、既可以检测抗原，又可以检测抗体 2、敏感性、特异性高 3、结果判断明显且客观，无需特殊仪器 缺点： 1、参与反应的物质多，影响因素也多 2、操作繁琐且要求严格，易发生失误