漆酶的层层自组装固定化及其酶学性质.pdf

华 南 理 工 大 学学 报 (自然 科 学 版 ) 第39卷 第9期 JournalofSouthChinaUniversity ofTechnology (NaturalScienceEdition) V01．39No．9 2011年9月 September 2011 文章编号：1000—565X(2011)09．0158．07 漆酶的层层 自组装固定化及其酶学性质水 李辉 付时雨 彭林才 詹怀宇 (华南理工大学 制浆造纸工程国家重点实验室 ，广东 广州510640) 摘 要：利用静电层层 自组装方法对漆酶进行固定化，在 固体基底 (云母片)上制备 了阳 离子聚丙烯酰胺(CPAM)／漆酶 自组装膜；通过紫外可见吸收光谱、原子力显微镜对 自组 装膜的活力增长情况及表面形貌进行分析表征，并对层层 自组装方法固定化漆酶的酶学 性质进行了研究．结果表明：CPAM／漆酶 自组装膜的活力随着 自组装层数的增多呈线性 增长，通过改变吸附周期可以有效地控制吸附在基底上的酶量；漆酶在 自组装膜中排列有 序，自组装膜的平均高度及均方根粗糙度随着 自组装层数的增大逐渐增大；固定化漆酶最 适 pH值为5．0，最适温度为50℃，比游离漆酶高5℃，固定化漆酶对ABTS的米氏常数为 0．042mmol／L，与游离漆酶相比，该固定化漆酶热稳定性明显提高；固定化漆酶具有 良好 的可重复使用性和存储稳定性． 关键词：漆酶；层层 自组装；固定化；热稳定性；存储稳定性 中图分类号：Q814 doi：10．3969／j．issn．1000-565X．2011．09．027 漆酶(Laccase，EC1．10．3．2)是一种含铜的多 易脱落；包埋法中，大多数酶包埋在较厚的聚合物膜 酚氧化酶，能够催化氧化酚类和芳胺类化合物 J， 中，增大了传感器的响应时间；共价交联法固定化条 在废水处理、芳香族化合物转化、食品加工、生物医 件苛刻，可能造成酶的失活，且不易控制酶固定化膜 药及生物传感器构建方面具有重要应用价值 ．但 的结构． 是，由于游离漆酶在使用过程中易变性失活，且不易 静电层层 自组装是通过交替吸附带相反电荷的 从反应体系中分离出来重复使用，这在一定程度上 聚电解质在固体基底上构建有序多层膜的一种固定 限制了漆酶的工业化应用．酶固定化是使酶得到更 化方法 ．该方法操作简单、条件温和，特别适合制 广泛利用的一个重要手段，固定化的漆酶在利用率、 备具有生物活力的薄膜．随着研究的不断深入，自组 稳定性等方面都较游离漆酶有所提高，可为生物传 装材料也逐渐从聚电解质扩展到生物大分子 (酶、 感器的制备提供 良好的条件．在生物传感器的制备 DNA、蛋白质等)。J、无机纳米颗粒 J、染料 等功 过程中，酶的固定是一个极为重要的环节 ，酶的固定 能性物质．通过层层 自组装技术制备的生物大分子 方法影响酶的活力和传感器的稳定性．目前，用于漆 自组装膜，具有结构高度有序、酶负载量可控等特 酶固定化的传统方法主要有物理吸附、包埋和共价 性，在构筑生物传感器、生物芯片等领域具有重要意 交联 J．然而，这些固定化方法都存在一些不足：物 义．目前，国内外关于葡萄糖氧化酶_5，加J、辣根过氧 理吸附法作用力较弱，酶负载量较低，且吸附的酶较 化物酶¨、过氧化氢酶 ¨通过层层 自组装技术构 收稿 日期：2010—12-26 基金项 目：国家 “973”计划项 目(2010BC732206)