第八章 植物体细胞杂交.pptVIP

第八章 植物体细胞杂交 第一节 植物体细胞杂交的概念 第二节 原生质体融合 第三节 杂种细胞的选择和体细胞杂种的鉴定 第四节 细胞质杂种 第五节 原生质体的遗传修饰 第六节 体细胞杂交的技术的应用 §1 植物体细胞杂交的概念 一 植物原生质体融合技术的发展 二 植物细胞杂交类型 一 植物原生质体融合技术的发展 1 原生质体融合技术发展 1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功；1970年，Power首次用硝酸钠进行为诱导剂进行了较大规模的原生质体 诱导融合；1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株；1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这也是第 一个植物细胞杂种1974年，Kao将聚乙二醇诱导融合法应用于植物细胞融合并建立了相应 的融合技术；1978年，Melchers获得了第一个属间细胞杂种（番茄＋马铃薯）；1981年，Zimmerman发明了电融合仪，并首次提出了电融合概念；1987年，Schweiger建立了单对原生质体电融合技术程序。 一 植物原生质体融合技术的发展 2 植物体细胞杂交（somatic hybridization): 将植物不同种、属甚至科间的原生质体通过人工诱导方法融合，然后进行离体培养再生植株的技术。 1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这也是第一个植物体细胞杂种。 1978年梅尔彻斯(Melchers)等首次获得了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种——“Potamato”。 二 植物细胞杂交类型 1 植物体细胞杂交类型 （1）体细胞杂交 双亲的体细胞原生质体进行融合，培养筛选鉴定，从而获得杂种植株的过程。 （2）配子-体细胞杂交 一个为体细胞原生质体，一个为性细胞原生质体，融合获得三倍体植株。 二 植物细胞杂交类型 （3）配子间细胞杂交 均为性细胞的原生质体融合，精-精，卵-卵，精-卵原生质体融合。 （4）微细胞杂交 诱导细胞产生高频率的微核，分离制备含有微核的原生质体，只携带一条染色体。 微小原生质体：只含有细胞核或部分染色体。 通过转移单个完整的染色体，建立单染色体添加系，解决细胞杂交出现的难题。 二 植物细胞杂交类型 （5）细胞质杂交 受体亲本的原生质体与供体亲本的细胞质杂交，主要改变细胞质遗传，改良叶绿体和线粒体基因组成。细胞质杂交可以缩短育种时间。 （6）细胞核的吸收 受体亲本原生质体与供体亲本原生质体细胞核融合，只是供体的核基因转移。 二 植物细胞杂交类型 §2 原生质体融合 一 融合方法 二 影响原生质体融合的因素 三 融合产物的细胞学 一 融合方法 1自发融合 在酶解细胞壁的过程中，有些相邻的原生质体能彼此融合形成同核体(homokaryon)，每个同核体包含2～40个核。 形成的原因：由不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连造成的。 减少自发融合的措施：在用酶液处理之前，使细胞受到强烈的质壁分离药物的作用，切断胞间连丝。 一 融合方法 2.诱发融合 （1）NaNO3处理 1909年，Kuster在一个发生了质壁分离的表皮细胞中，低渗NaNO3溶液可以引起2个亚原生质体的融合。 缺点：异核体(heterokaryon)形成频率不高，对细胞具有毒害作用。 一 融合方法 （2）多聚化合物法 加入一些多聚化合物如多聚鸟氨酸，改变原生质体表面的物理特性，增强原生质体内吞作用。 缺点：可能使细胞膜不可逆破坏。 一 融合方法 （3）高PH-高浓度钙离子处理 改变膜的通透性，使细胞融合，可以使种间细胞融合。 缺点：但对于有些原生质体系统，这样高的pH值是有毒的。 一 融合方法 （4）PEG诱导 原理：PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成氢键，从而在原生质体之间形成分子桥，其结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合。另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。 一 融合方法 特点： ①异核体形成的频率高，可重复性强，对大多数细胞低毒； ②形成双核异核体的频率高。 一 融合方法 注意事项： ①PEG的分子量: (MW 1500～6000)分子量大融合效果好，但有毒害作用；分子量小，不易诱导融合。使用浓度15%-45%。一年生植物用低分子量，多年生植