选修1微生物的培养与应用选修1微生物的培养与应用.ppt

* （2）稀释涂布平板法 结果分析与评价 1.制作的平板培养基是否被杂菌污染？ ——将未接种的培养基在恒温箱中保温1~2d 后，观察是否有菌落生长。 2.接种操作是否符合无菌要求？ ——如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，说明接种操作符合要求；如果培养基上出现了不同形态的菌落，说明无菌操作还未达到要求。 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 一、研究思路 1.分离（筛选） ——选择培养基 2.计数（活菌数目） ——稀释涂布平板法 稀释涂布平板法能够活菌计数的理论依据是什么？怎样保证估计值更接近实际值？ 为什么统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？ * （2）显微镜直接计数 计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为： 1 mm 、1 mm和 0.1mm 计数室的容积：0.1mm3 （万分之一毫升） 取样：稀释一定倍数的菌液 二、实验设计 1.土壤取样 ——从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层3cm左右，再取样。 2.制备培养基： ——准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 3.微生物的培养与观察 ——梯度稀释、稀释、培养、观察 4.细菌的计数 鉴别培养基：鉴别尿素分解菌 加入酚红指示剂 课题成果评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？ ——对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 2.样品的稀释操作是否成功？ ——如果得到了2个或2个以上菌落数目在30~300的平板，说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计数。 （09安徽卷）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105 、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，370C恒温培养24-48小时 D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一、课题背景与意义 ——能够充分利用秸秆等废弃物生产酒精等 二、纤维素分解菌的筛选 ——刚果红染色法 加入刚果红，菌落周围产生透明圈 鉴别纤维素分解菌 未接种的尿素培养基 10-5 10-4 专题2 微生物的培养和利用 无菌技术 倒平板操作 平板划线操作 稀释涂布平板 植物组织培养 纯化 保障 应用 应用 纯化、计数 动物细胞培养 尝试应用 为提高果酒的品质，更好的抑制其他微生物的生长，可以直接在果汁中加入人工培养的酵母菌。而人工培养的酵母菌，首先需要获得纯净的酵母菌菌种。 如何将将葡萄上附着的酵母菌分离出来，获得纯净的菌种呢？ 资料信息： ——酵母菌大多数为腐生，生活在含糖量较高和偏酸性（pH4.5~6.0)环境条件下生长繁殖较快； ——在酸性条件下，霉菌比酵母菌生长缓慢； 药品用具： ——无菌水、链霉素等抗菌素、乳酸马铃薯葡萄糖液体培养基、马铃薯葡萄糖琼脂平板、0.1%的美篮染色液；恒温培养箱、棉塞、纱布、无菌吸管、接种针等。 实验设计： 如何选择培养（富集培养）？ 如何抑制细菌的生长繁殖？ 如何通过控制培养时间，达到富集酵母菌，抑制霉菌的生长？ 如何从富集的培养液中，纯化酵母菌？ 如何保藏纯化的酵母菌菌种？ 选择培养 ——⑴直接将未经冲洗的一小块果皮，或取少量用无菌水制备的果园、菜园等地的土样悬浮上清液接种到装有乳酸马铃薯葡萄糖液体培养基的试管中（用棉塞或纱布塞封口），于26~28℃，培养24h，培养液变浑浊。 ——⑵用无菌吸管取上述培养液0.1mL，加到另一新的乳酸马铃薯葡萄糖培养基中，再培养24h，使酵母菌大量增殖，此时培养时间不要过长，否则霉菌开始生长。 鉴定成果 ——在无菌操作条件下，取少许培养的菌液，滴在载玻片上的0.1%美篮染色液中，混匀后加盖玻片，用显微镜观察。 纯化培养 ——用灭菌的接种针沾取富集的培养液，在马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基上划线，于26~30℃培养，挑取单菌落，再次于新的同样的平板培养基上划线分离纯化，经多次分离，最终可获得纯酵母菌。 （11年海淀区期中） 下列关于微生物培养的叙述，不正确的是（ ） A. 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵 B. 高温灭菌目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢 C. 划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落 D. 稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目 （11年海淀期中）从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的 A. 将土壤用无菌水稀释，制备10-3~1O-5土壤稀释液B. 将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C. 用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌 D. 从周