细胞内多糖和过氧化物酶的定位.pptVIP

细胞内多糖和过氧化物酶的定位 Experiment 8 * 【实验目的】 掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法 * 【实验原理】 高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。 * 【实验材料】 一、仪器：显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等 二、材料：马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎 三、试剂： 1．高碘酸溶液： 高碘酸（HIO4·2H2O） 0.4g， 95%乙醇 35ml， M/5醋酸钠溶液（2.72g醋酸钠溶于100ml H2O） 5ml， 蒸馏水 10ml 2．Schiff试剂 3．亚硫酸水溶液 4．70%乙醇 5．联苯胺溶液：在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20%体积的H2O2 ，每2ml加一滴。 6．0.1%钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100ml 0.85%盐水 * 【实验内容】 （一）细胞中多糖的测定：高碘酸—雪夫（PAS）反应 1．把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。 2．浸于高碘酸溶液5～15min 。 3．移入70%乙醇中浸片刻。 4．Schiff试剂染色15min 。 5．亚硫酸溶液洗三次，每次1 min。 6．蒸馏水洗片刻。 7．装片镜检。 （二）细胞中过氧化物酶的测定：联苯胺反应 1．把洋葱根尖徒手切成20～40μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。 2．浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min（钼酸铵的作用是催化剂）。 3．浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。 4．在0.85%盐水溶液中洗1min 。 5．将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查。 * 【作 业】 1．简述PAS反应及联苯胺反应的原理。 2. 绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。 *