选修1-专题四.pptVIP

1．方法及原理 实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来； 方　法 原　理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同 ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离 ①原理：透析袋能使小分子自由出入，而将大分子保留在袋内，透析可以除去样品中分子质量较小的杂质。 ②过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12 h。 ③目的： ④图示： ⑤注意：透析时间为12 h。透析袋是用硝酸纤维素制成，小分子可自由进出，而大分子保留在袋内。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 3．结果分析与评价 项　目 分　析 血液样品的处理 分层明显→样品处理完成 分层不明显的原因 凝胶色谱柱的装填 放一支与凝胶柱垂直的日光灯→直接检查加入大分子有色物质如蓝色萄聚糖－2 000或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整→装填成功 血红蛋白的分离 血红蛋白的红色