结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究.pdfVIP

滨州 医学院学报2009年 2月第32卷第 1期 BMUJournal，Feb．2009，Vo1．32，No．1 · 论 著 · 结核杆菌 PEPCK免疫作用的初步研究 柏雪莲’ 王志强 刁兴华 张 珍 刘春会 郭立东 1滨州医学院病原生物学教研室 滨州市 256603；2滨州医学院附属医院 【摘要】 目的 初步研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)的免疫作用。方法 用敲除pckA基因的卡介苗(BCG ApckA)和野生型卡介苗(BCG—WT)分别感染小鼠，取肺脏进行病理分析；取脾脏用流式细胞仪检测 CD4 、CD8 T细胞、 CD4 ／CD8 ，酶联免疫吸附试验检测 IL-12；取脾脏进行结核杆菌的培养，比较两组菌落数量。结果 BCGApckA感染的小 鼠比BCG—WT感染的小鼠肺脏内产生的结核结节少且不典型，炎性程度低；BCG-wT感染的小 鼠脾脏 内的CD4 T细胞和 CD4 ／CD8 及 IL．12滴度明显高于BCGApckA感染的小鼠；BCGApckA株形成菌落的数量明显低于BCG-WT株形成菌落的 数量。结论 pckA基因为结核杆菌生长所必需，其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应，可能是一种很好的疫苗候 选分子。 【关键词】 结核杆菌；pckA基因；磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶；免疫保护 【中图分类号】 R378．91 【文献标识码J A 【文章编号】 1001-9510(2009J014．3001-03 Theprimaryresearchonphosphoenolpyruvatecarboxykinaseimmuneeffectofmycobacterium tuberculosis BAIXuelian WANGZhiqiang DIAO Xinghua etal DepartmentofParasitologyandBioloyg ，BinzhouMedicalUniversity，Binzhou256603 A【bstract】 Objective Toresearchtheimmuneeffectofphosphoenolpyruvatecarboxykinase(PEPCK)ofmycobacteriumtubercu- losis．M ethods MicewereinfectedwithwildtypeBCG andpckA mutatedBCG respectively．Thelunghistoloyg ofinfectedmicewas checked．ThenumberofCD4 andCD8 Tcells-CD4 ／CD8 wereassayedbyflowcytometry．Interleukin一12wasdetectedbyELISA． BCG from spleensoftwogroupsofmicewasculturedandthenumberofCFUwastakencount．Results Granulomas inpckAmutated BCG (BCGApckA)infectedmicewerefewerandmoreatypicalthanthoseinmiceinfectedwithwildtype(BCG—WT)．Thenumberof CIM TcellsandtheratioofCIM ／CD8 from theBCG—WTgroupweresignificnatlyhjgherthanthoseform BCGA pckA group．Th e titerofinterleukin．12ofBCG．W rinfectedmiceWas higherthatthatofBCGA pckA rgoup．AndthenumberofBCG CFU rfom BCG- WTrgoupwasmorethanthatofBCGApckAgroup．Conclusion pckA geneisnecessaryforthergowthofmycobacterium tuberculo— sis．PEPCK caneffectivelyinduceimmuneresponsesnadcanbeagoodcandidateofrvaccine．