ABO正反定型不符患者血型的血清学及基因测序鉴定 (附1例报告).docVIP

ABO正反定型不符患者血型的血清学及基因测序鉴定 (附1例报告) 张业翠 吴鹏 武文 郭兴莹 王艳青 黄象艳 济南军区总医院 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 目的 对1例ABO正反定型不符患者血型进行血清学及基因测序鉴定。方法 选择1例标准血型血清学方法 (微柱凝胶卡+全自动血型配血分析仪) 鉴定结果为ABO正反定型不符 (正定型为O型, 反定型为A型) 患者, 抽取其血液标本, 采用试管法做进一步的血清学鉴定, 包括正反定型复查、红细胞吸收放散试验;提取血液基因组DNA, 采用PCR法扩增ABO基因第6、7外显子并测序。结果 试管法血清学表现为ABO血型正反定型不一致, 正定型未检测到A抗原和B抗原, 反定型血清中存在抗-B及弱的抗-A;红细胞做吸收放散试验检出A抗原, 初定为A亚型。测序结果与A101参考序列相比较, 发现Ax13亚型940位碱基AG的亚型决定性基因突变。结论本例患者ABO血型疑似A亚型, ABO基因型为Ax13/O01, 第七外显子940位AG突变导致A抗原表达减弱。 关键词： ABO血型; Ax13亚型; 基因测序; 基因突变; 作者简介：黄象艳, E-mail:xiangyan73@ 收稿日期：2017-04-30 Received： 2017-04-30 血型是指血液成分 (包括红细胞、白细胞、血小板) 表面的抗原类型, 是血液中各种成分的遗传多态性标志, 通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型。国际输血学会已经在人类中正式报告了属于36个血型系统的300多种红细胞抗原[1]。ABO血型是临床输血医学中最重要的红细胞血型系统之一, 涉及临床安全输血、器官移植、医学遗传学等领域[2]。ABO血型系统除正常的A、B、O、AB这4种血型外, 还具有多个亚型, 表现为抗原明显减弱或正反定型不一致。ABO亚型的主要发生原因是ABO基因编码区的突变, 包含点突变、缺失突变等[3]。对于常规血清学检测不能确定的血型, 应该行ABO基因测序分型。本研究采用标准血清学鉴定和ABO基因测序的方法鉴定1例血清学实验正反定型不符的疑难血型标本, 并分析Ax亚型的血清学特征和基因序列特征。现报告如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料 患者男, 34岁。体外受精术前采用标准血型血清学方法 (微柱凝胶卡+全自动血型配血分析仪) 鉴定血型, 结果为ABO正反定型不符 (正定型为O型, 反定型为A型) 。本研究已获我院医学伦理委员会批准。患者对本研究知情同意且已经签署知情同意书。 1.2 ABO血型血清学鉴定方法 (1) 试管法ABO正反定型[4]:取洁净小试管6只, 标明抗-A、抗-B、AC、BC、OC、自身C, 标记有抗-A、抗-B字样的小试管分别加入抗A、抗B标准血清各1滴及被检者5%三洗红细胞生理盐水悬液各1滴;标记有AC、BC、OC字样的小试管分别加入相应的5%试剂ABO细胞各1滴及被检者血清各2滴, 标记有自身C字样的小试管加入被检者5%三洗红细胞生理盐水悬液l滴及血清2滴, 以上各管均充分混匀, 放入血型血清学专用离心机以1 000×g离心15 s, 判读结果。 (2) 红细胞吸收和放散试验:取患者三洗压积红细胞1 m L, 加等量单克隆抗-A试剂混匀, 置于4℃环境中吸收1 h, 然后用冷盐水洗涤8次, 再加等量常温的生理盐水混匀, 放入56℃热放散10 min后离心取放散液。用低离子抗人球卡将放散液与A试剂红细胞反应, 并将最后一次离心洗涤后的上清液作为平行对照, 孵育离心观察结果。 1.3 ABO基因测序方法 抽取患者外周静脉血2 m L置于EDTA抗凝管中, 使用TIANamp血液DNA提取试剂盒, 按步骤提取全血DNA, 用外显子6、7扩增试剂盒和PCR法扩增ABO基因外显子6和7, 将PCR产物送上海生工生物工程公司进行直接测序。将测序结果与红细胞基因序列数据库中的ABO等位基因进行比对, 确定亚型。 2 结果 2.1 血清学鉴定结果 试管法复查血型, 室温条件下结果与微柱凝胶法结果一致。正定型患者红细胞与抗-A、抗-B标准血清均无凝集;与抗-AB反应凝集强度为++;与抗H反应凝集强度为++++;反定型患者血清与标准反定细胞AC、OC均无凝集, 与BC凝集强度为++++, 自身对照为阴性。反定型放4℃10 min后立即离心, 结果显示血清中除检出有较强的抗-B外, 还检出弱的抗-A (凝集强度为+/-) ;4℃30 min后再次离心抗-A凝集强度较前有所增强 (凝集强度为++) 。血清学格局呈现A亚型。吸收放散试验放散液与A试剂红细胞呈阳性反应, 最后一次离