乙肝标志物灰区标本的处理.ppt

乙肝标志物灰区结果报告方式的应用探讨 杨亚磷 HBsAg金标、酶标结果不一致 北京： ELISA阴性，金标阳性 新疆：ELISA阴性，金标强阳性 解决办法：送当地，用进口化学发光检测为阴性 　室间质评酶免和进口化学发光结果不一致 常见问题 同一实验室重复结果不一致 不同实验室结果不一致 同一实验室不同方法间结果不一致 不同方法间以及不同实验室结果不一致的原因 操作手法的差异 不同方法灵敏度、特异性差异 不同实验室使用的试剂差异 判断标准（CUT-OFF值）（溯源性） ELISA检测乙肝的主要影响因素 1\标本的质量 2\加酶结合物前放置不同时间对竞争法结果的影响 3\温育 4\洗板 解决办法:检测标准化 感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认 ---摘自李金明中华检验医学杂志2006  年7月第29卷第7期 外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长和标本凝固不全等。 血液采集后，如收集管中无促凝剂和抗凝剂，则血液通常在半小时后开始凝固，18-24h完全凝固。日常检验中，常在血液还未开始凝固时即离心分离血清，此时因血液没有完全凝固，离出的“血清”并非为完全血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，如将其加入微孔中，在ELISA测定过程中仍可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。 全国艾滋病检测技术规范(2004年版) 血清样品采集和处理：用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血，室温下自然放置1~2小时，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15分钟，吸出血清备用。 抗凝血样品采集和处理：用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管)，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4﹢/ CD8﹢ T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4~8小时内分离PBMC和血浆，否则应在24～48小时内分离血浆和血细胞。 金标抗HIV(1+2) 血清、血浆、末梢血、全血 样本处理 做好三查三对，保证样本正确 离心 3500r/min离心10min 不可轻视，不厌其烦 非抗凝血，保证血清清亮、无混浊 实验操作时差的影响   定 义：加入样品、试剂及混匀时间的差异称为操作时差。 操作时差在每个试验中都存在，尤为手工操作更著，对结果都 会产生或大或小的影响。 ELISA常用项目，例如：乙肝两对半，多是成批检测。从加第 一个样本到最后一个样本，包括中间换吸管尖的工作，需数十 分钟；加试剂及混匀也同样存在着前后的时间差异，致使抗原 抗体反应和酶促反应时间上的不一致，对竞争法模式的项目影 响更大。若不注意操作，时差会导致假阳性或假阴性的结果。 竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响 加入标本后放置不同时间再加入抗-HBc-HRP对检测结果的影响 放置时间 阴性 临界值－标本A450nm值 假阳性 （min） 标本数 0.3 0.3~0.7 0.7 (%) 0 75 10 3 6 0 2 68 13 7 6 7(7.4) 5 65 15 8 6 10(10.6) 10 56 16 12 10